15 декабря на Большеохтинском мосту запускается реверсивное движение
15 декабря в 6.00 на Большеохтинском мосту вступает в действие новая схема дорожного движения с использованием полосы реверсивного движения.
В настоящее время мост разделен на 5 полос движения. Центральная полоса предназначена для реверсивного движения и выделена разметкой 1.9 и светоотражающими элементами. В ее начале и на всем протяжении установлены трехсекционные реверсивные светофоры Т4.ж. и дорожные знаки 5.8, 5.9 («Реверсивное движение» и «Конец реверсивного движения).
Исходя из измерений интенсивности транспортных потоков, переключение реверсивных светофоров будет выполняться следующим образом:
- С 6.00 до 15.00 (до 14.00 по пятницам, до 16.00 субботам и воскресеньям) по реверсивной полосе будет разрешено движение от Красногвардейской пл. в сторону Тульской ул.
- С 15.00 (с 14.00 по пятницам, с 16.
- С 24.00 до 6.00 движение по реверсивной полосе запрещено.
С новыми схемами движения по Большеохтинскому мосту можно ознакомиться по ссылке: http://krti.gov.spb.ru/press/news/23697/
Предложение по изменению организации дорожного движения при подъездах к Большеохтинскому мосту появилось в 2014 г. в связи с высокой нагрузкой на переправу. В часы пик мост не справлялся с большими транспортными потоками, в результате чего на подъездах образовывались серьезные заторы. В 2014 году СПб ГБУ «Центр транспортного планирования Санкт‑Петербурга» было выполнено моделирование реверсивного движения на Большеохтинском мосту, в результате которого стала очевидна целесообразность реализации проекта.
В марте 2015 года СПб ГКУ «Дирекция по организации дорожного движения Санкт‑Петербурга» был проведён эксперимент по организации реверсивного движения на переправе, задачей которого была апробация концепции внедрения реверсивного движения с целью снижения заторовой нагрузки на самой переправе и на прилегающей к ней улично-дорожной сети.
Для справки:
Реверсивное автомобильное движение предполагает создание специально выделенных полос, направление движения на которых не является постоянным, а изменяется в течение дня. Благодаря реверсивному движению появляется возможность разгрузить оживленные магистрали и улицы. Такие полосы пользуются большой популярностью в Европе и США, в настоящее время реверсивное движение все большее распространение получает и в России. В частности, реверсивные полосы есть в Москве (на Шереметьевской улице и Волгоградском проспекте), в Самаре, Перми и других городах. Также реверсивная полоса была создана на Борском мосту в Нижнем Новгороде: движение по ней запускается в периоды большой загруженности моста и подъездов к нему.
В Санкт‑Петербурге Большеохтинский мост станет первым участком улично-дорожной сети, на котором будет организовано реверсивное движение на постоянной основе.
Регулировать движение по реверсивной полосе на улице Гонсиори будут специальные светофоры | Эстония
Уже совсем скоро по улице Гонсиори вновь поедут обычные автомобили и водители впервые испытают на собственном опыте, что такое реверсивная полоса движения, ведь до сих пор в Эстонии этого нигде не было. Суть новшества проста — есть три полосы, две из них отводятся общественному, а центральная — личному транспорту. С 6 утра и до полудня поток по центральной полосе движется в центр города, в остальное время наоборот, передает «Актуальная камера».
Но как в таком случае будет организовано движение?
«Движение будут регулировать светофоры. Есть специальные светофоры для регулирования реверсивного движения. Если горит зелёная стрелка, то можно в этом ряду ехать, если горит красный крестик, тогда этот ряд нельзя использовать», — пояснил завотделом Таллиннского транспортного департамента Талво Рюйтельмаа.
Получается, что если загорелся красный сигнал светофора, автомобиль сразу же должен покинуть центральную полосу и сместиться на полосу общественного транспорта. И далее при первой же возможности ему необходимо покинуть улицу Гонсиори, повернув направо.
Возле перекрёстка улиц Гонсиори и Пронкси для пешеходов оборудовали тротуар, выложенный плиткой, а по соседству из асфальта сделана велодорожка. Такой дизайн был позаимствован у других стран, например, во многих европейских городах пешеходную зону уже давно стали отмечать именно так.
Строительные работы на Гонсиори выходят на финишную прямую и, как только улица будет доделана, строительство Рейди теэ перейдёт в новую фазу.
«Как только Гонсиори будет готова и появится необходимость закрыть ряд возле памятника «Русалка», тогда это придётся сделать. Но мы постараемся учитывать желание водителей ездить утром в сторону города, а вечером — выезжать из города. В таком случае там придётся перестраивать движение дорожными знаками», — рассказал Рюйтельмаа.
В качестве объезда перекрестка у памятника «Русалка» жителям Пирита и Виймси предлагают использовать перекрёсток Пярнамяэ, а оттуда уже — либо на Петербури теэ или на Лаагна теэ.
Эксперты считают, что это всё равно вызовет заторы.
«Я думаю, что будет полный коллапс. Мы видели подобный пример, когда была реконструкция Вабадузе вяльяк, тоже очень важного узла. Но я думаю, что всё-таки дорожное движение — это такая система, которая немного организует себя сама. Люди найдут самые лучшие возможности, может быть у некоторых есть возможность поехать не в час пик, а после него или раньше», — считает эксперт в области организации дорожного движения Даго Антов.
По планам столичных властей, улица Гонсиори должна быть готова к 15 ноября. Когда ограничат движение возле памятника «Русалка» пока точно не известно, чиновники намерены проводить эти работы в период школьных каникул, однако признаются, что на это понадобится минимум 2-3 месяца.
Реверсивная полоса на проспекте Мира заработает в ноябре
Реверсивная полоса на участке проспект Мира от Третьего Транспортного Кольца до Садового кольца вводится в постоянную эксплуатацию, сообщили накануне в Центре организации дорожного движения. Разметку дорожные службы вынуждены были нанести в минувшие выходные, пока сохранялась плюсовая температура. Но окончание работ и официальное открытие реверсивного движения запланировано на начало ноября, подчеркивается в сообщении ГКУ ЦОДД.
Организация призывает водителей быть предельно бдительными на данном участке дороги и соблюдать правила дорожного движения, особенно в части запрета выезда на полосу без соответствующих знаков и разрешающего сигнала светофора.
Ранее сообщалось, что в столице до конца года откроется еще три участка с реверсивным движением, в дополнение к трем, уже работающим. В частности, реверсивные полосы функционируют на: Волгоградском проспекте, шоссе Энтузиастов, Ярославском шоссе от МКАД до Северянинского путепровода. ЦОДД считает, что практика продемонстрировала, что участки с реверсивным движением позволяют эффективно бороться с пробками, разгружая наиболее проблемное направление транспорта.
Запланировано организовать реверсивное движение на проспекте Мира от ТТК до Садового кольца, на Рязанском проспекте от улицы Академика Скрябина до Московской кольцевой автодороги и на Шереметьевской улице от ТТК до Калибровского путепровода.
СПРАВКА «ВМ»
Реверсивная полоса, зачастую, одна, располагается в центре проезжей части. Эту полосу задействуют для проезда в ту или иную сторону, в зависимости от общей загруженности направления. На этих участках должны быть установлены реверсивные светофоры, работающие в режимах «движение запрещено» и «движение разрешено». В утренние часы по полосе реверсивного движения будет организован проезд в сторону центра, а во второй половине дня – в сторону области. Управление движением планируется осуществлять либо из Общегородского центра управления дорожного движения (ОЦУД), либо с ближайшего поста ГИБДД. Для этого над каждым участком будут установлены видеокамеры, которые позволят эффективно использовать реверсивные полосы.
Реверсивная полоса обозначается разметкой 1.9 (представляет собой двойную прерывистую линию и указывает на границы полос движения, где осуществляется реверсивное регулирование, а также разделяет транспортные потоки противоположных направлений при выключенных реверсивных светофорах). Если между встречными потоками присутствует реверсивная разметка, а светофоры, регулирующие движение по ней отсутствуют, либо не работают, то выезд на полосу реверсивного движения запрещен. Правила ПДД разрешают пересекать линию разметки 1.9 при неработающих или отсутствующих реверсивных светофорах лишь в том случае, если она расположена справа от водителя.
Поделиться в FBПоделиться в VKПоделиться в TWПоделиться в OKПоделиться в TG
Реверсивное движение организовали на мосту через реку Учу в Ивантеевке
Источник: Министерство транспорта и дорожной инфраструктуры Московской области
Дорожные службы завершили ремонт первой части моста в Студенческий проезде через реку Учу в Ивантеевке, для проезда на мостовом переходе введено реверсивное движение со светофорным регулированием по отремонтированной части, сообщает пресс-служба Министерства транспорта и дорожной инфраструктуры региона.
«Сейчас завершена часть работ на мосту через реку Учу. На одной из полос движения обновили асфальтобетонное покрытие, заменили деформационные швы, для повышения безопасности установили барьерное и перильное ограждения. На второй полосе моста работы продолжаются, поэтому схема движения транспорта была изменена», — рассказал министр транспорта и дорожной инфраструктуры Алексей Гержик.
На второй полосе движения проходит устройство площадки для разборки моста и монтажа балок пролетного строения, разборка существующих железобетонных конструкций, а также валка деревьев в зоне полосы отвода. Завершить работы планируют в 2020 году.
Всего в Подмосковье в этом году запланировано отремонтировать порядка 26 искусственных сооружений, на 9 из них проведут капитальный ремонт. Ремонтные работы на 14 сооружениях планируется завершить в конце 2019 года, а на 12 объектах – в 2020 году. С адресным списком ремонта искусственных сооружений можно ознакомиться на сайте Министерства транспорта и дорожной инфраструктуры Московской области.
Курс на безопасность: как в Подмосковье повышают качество автодорог>>
Источник: Министерство транспорта и дорожной инфраструктуры Московской областиКак проехать по улице Гонсиори с реверсивным движением? > Kesklinna veebileht > Tallinn
Как проехать по улице Гонсиори с реверсивным движением?
В четверг в Эстонии откроется первая улица с реверсивным движением.
Таллиннский транспортный департамент напоминает, что:
- При передвижении по улице Гонсиори дорожные знаки, дорожная разметка (в том числе надпись BUS) имеют такое же значение, как в любом другом месте.
- Полоса с реверсивным движением обозначена двойной прерывистой линией
- Полосу с реверсивным движением можно использовать только тогда, когда над ней горит зеленая стрелка
- Если над полосой с реверсивным движением горит красный крест или светофор не работает, то пользоваться полосой нельзя.
Водителю нужно незамедлительно перестроиться вправо на полосу общественного транспорта и повернуть на первом же повороте направо.
- Кроме этого, нужно уступать дорогу, руководствуясь дорожными знаками и основными (обычными) светофорами. NB! Если у основного светофора горит красный свет, то зеленая стрелка светофора полосы с реверсивным движением не дает право проезда. В этом случае нужно остановиться у стоп-линии. Продолжить движение можно, когда загорится зеленый свет основного светофора.
- При повороте на улицу Гонсиори нужно сначала проехать на правую полосу общественного транспорта, убедиться, что над полосой с реверсивным движением горит зеленая стрелка, и только после этого перестроиться на полосу с реверсивным движением
- Чтобы совершить поворот с улицы Гонсиори вправо необходимо перестроиться в правую полосу общественного движения. Поворот налево с улицы Гонсиори не разрешен в целях обеспечения безопасности.
- На улице Гонсиори по полосе с реверсивным движением запланировано движение сторону центра города с 06.
00 до 11.50 и в сторону из центра города с 12.00 до 05.50.
- Если вы заметили ошибку или неисправность в работе светофора, то позвоните по телефону 656 3535.
- Если на полосе с реверсивным движением находится препятствие, то нужно его объехать по полосе общественного транспорта, не меняя направление движения.
Безопасного движения!
Последние изменения 13.11.2018
Помогут реверсивные полосы
Как ликвидировать пробки в Москве?
В первую очередь необходимо направить средства на строительство мостов через железнодорожные пути и Москву–реку, чтобы закольцевать десятки улиц, идущих параллельно третьему кольцу и МКАД. Таким образом возникнут еще несколько транспортных колец, и многие автомобилисты станут ездить более короткими маршрутами, не загружая МКАД и ТТК. Также целесообразно соединить сотни улиц, идущих вдоль проспектов, чтобы от МКАД до центра Москвы (ТТК) можно было добраться, не выезжая на проспекты. Это снизило бы транспортную нагрузку на них.
Безусловно, нужно расширять проспекты и улицы, на которых образуются пробки, за счет разделительных полос и прилегающих территорий, на которых в настоящее время располагаются рекламные щиты, что вполне осуществимо для большинства улиц и проспектов без сноса капитальных строений.
Трамвайные пути занимают целую полосу движения в каждом направлении, по которой движется один трамвай вместо сотни автомобилей, причем электротранспорт постоянно тормозит движение автомобилей, следующих с ним в попутном направлении, т. к. автомобилисты вынуждены постоянно останавливаться и пропускать входящих и выходящих из трамвая пассажиров.

В районе выезда с МКАД на Носовихинское шоссе место выезда совпадает с местом съезда аатотранспорта с этого шоссе. В результате в данном месте постоянно происходят аварии и возникают пробки. Сделав въезд на 50 м ближе, можно полностью решить данную проблему. При въезде с Садового кольца на Тверскую улицу в районе Триумфальной площади поток автомобилей, въезжающих с Тверской улицы, пересекается с потоком автомобилей, съезжающих с Садово–Триумфальной на Тверскую, хотя этого тоже легко можно избежать.

В большинстве случаев установление одностороннего движения на улице не является оправданным, т. к. заставляет водителей проделывать в среднем вдвое больший путь, чтобы попасть к дому на улице с односторонним движением, чем если бы на этой улице было установлено двустороннее движение. Это наглядно видно на примере улицы Таганская.
При въезде с Хорошевского шоссе на ТТК отсутствует правый поворот, поэтому водители, нуждающиеся в нем, должны сделать левый поворот, доехать до Ленинградского проспекта 1,5–2 км, развернуться там и вернуться обратно, тем самым теряя время и затрудняя движение на ТТК. Сквозные проезды в большинстве дворов отсутствуют, многие выезды и въезды перегорожены ограждениями и столбами, что затрудняет выезд из жилой зоны. Мест для стоянки автомобилей катастрофически не хватает, хотя необходимые площади для размещения автостоянок имеются в большинстве дворов. Это является и нарушением мер противопожарной безопасности, согласно которым должен быть обеспечен свободный проезд со всех сторон к каждому многоквартирному дому.

Автовладельцы могли бы и сами оборудовать места стоянок, но мешают полуметровые заборчики, установленные на деньги налогоплательщиков, непонятно что ограждающие. В результате многие автовладельцы вынуждены ставить автомобили на проезжей части, что затрудняет движение и повышает риск угона и повреждения автомобилей. Часть автовладельцев предпочитает оставлять свои авто у станций метро и продолжить свой путь на общественном транспорте. Но отсутствие там автостоянок не дает многим желающим этого сделать, и они вынуждены продолжить свое движение в пробках (хотя имеющиеся около большинства станций площади это позволяют).
Номера домов и названия улиц не видны с проезжей части, что затрудняет и движение в целом, поэтому необходимо установить указатели соответствующих размеров таким образом, чтобы водитель мог легко и быстро найти нужную улицу и дом.
Необходимо уменьшать количество светофоров, заменяя их транспортными развязками в двух уровнях (как на МКАД) и надземными пешеходными переходами в первую очередь в тех местах, где светофоры регулируют только переход пешеходов через улицу.

Помимо расширения МКАД целесообразно организовать строительство кольцевой автодороги в Московской области, проходящей в нескольких километрах от МКАД. Перед началом строительства следует провести математические расчеты различных вариантов вложения имеющихся средств, чтобы выбрать наиболее эффективный.
Андрей КИРИЛЛОВ,
кандидат экономических наук
Георгий ЗАРЖИЦКИЙ,
бывший строитель Госстроя России
Сезонный салат из стейка Reverse Sear Strip от mollyjean4 | Быстрый и легкий рецепт
Если вы новичок в искусстве обратного шептания, добро пожаловать! Вы делаете первый шаг к лучшей говядине в своей жизни. Первый раз, когда я использовал обратное жаркое, я приготовил огромное рождественское жаркое. Моя мама думала, что я сошел с ума, и волновалась, что я испортил кусок мяса и Рождество сразу, но я призвал ее сохранять веру, и мы наслаждались лучшим жареным НА КОГДА-ЛИБО.
Принцип использования обратного шептала заключается в том, чтобы готовить мясо на медленном огне, пока оно не нагреется почти до желаемой вами температуры.Как только вы достигнете желаемой конечной температуры, вы вынимаете мясо из духовки и обжариваете его на кричащей горячей сковороде, чтобы выполнить действие реакции Майяра и образовать золотисто-коричневую корку. Вы можете использовать эту технику с любым куском стейка толщиной более 1 ½ дюйма, любым более тонким, и вы рискуете переварить, а этого никто не хочет!
Что касается говядины, которую вы используете, я всегда выбираю говядину травяного откорма, в частности, говядину травяного откорма Silver Fern Farms Angus из Новой Зеландии, потому что это самое вкусное, чистое и выращенное естественным образом мясо, которое вы можете купить. Он имеет натуральную мраморность и насыщенный говяжий вкус, в результате чего получается сочная и нежная говядина высокого качества. Кроме того, мне никогда не нужно беспокоиться о гормонах или добавках для роста антибиотиков.
Я использовал стейки из говядины Silver Fern Farms Angus из коробки с образцами «Избранное мясника», доступной на MarxFoods.com, чтобы приготовить эпический салат из стейков со сливочной заправкой зеленой богини на основе авокадо. Лучшее в этих коробках для образцов то, что они приходят прямо к вашей двери, отправляются замороженными в течение ночи, без необходимости идти в продуктовый магазин.Мне нравится, когда в моем морозильнике всегда полно вкусной говядины Grass-Fed из Новой Зеландии, чтобы я мог быстро и легко приготовить ужин.
В течение ограниченного времени вы получите скидку 10% на новозеландскую говядину ангусского откорма, полученную прямо к вашей двери, при заказе коробки для образцов ангуса Silver Fern Farms на сайте MarxFoods.com. Используйте код NZGRASSFED для скидки!
Домашняя обжаренная в обратном направлении полоска NY: идеальный стейк каждый раз
Что, если бы мы сказали вам, что существует простой и почти надежный способ приготовления для приготовления идеального стейка каждый раз?
Да, верно, мы говорим о стейке , обжаренном в обратном направлении, или, точнее, о домашней полосе из Нью-Йорка, обжаренной обратным способом.Это простой метод приготовления, при котором толстый стейк сначала долго и медленно готовят в духовке для готовности, а затем обжигают на горячей сковороде, чтобы получить желанную красивую коричневую корочку и закрепить весь этот аромат.
Итак, отбросьте эти ошибки в стейке и навсегда избавьтесь от сгоревшего или недоваренного серого мяса, а вместо этого каждый раз думайте о глубоких темных тонах снаружи и сочных розовых интерьерах.
Пока мы говорим о стрипе Нью-Йорка — стейк без костей, вырезанный из короткой филейной части говядины, , также известный как стейк из ракушек, стейк из канзас-сити, стейк из верхней части филе, стейк из вырезки отеля и стейк амбассадор — эта техника одинаково хорошо работает для любой толщины. стейки, такие как стейк стрип, стейк рибай, стейк портерхаус, стейк томагавк, стейк на косточке, три-кончик и филе миньон.
Вот простой способ сделать идеальную нью-йоркскую полосу обратной обжарки в домашних условиях:
1. Сильно посолите, приправьте или рассолите стейк NY стрип при комнатной температуре. Для максимального эффекта оставьте стейк на ночь в холодильнике. Процесс засолки гарантирует, что стейк сохраняет больше влаги в процессе приготовления.
2. Поместите приправленный стейк в низкую духовку и дайте ему медленно готовиться, пока он не достигнет желаемой внутренней температуры. Используйте зонд термометра, чтобы проверить внутреннюю температуру на готовность.Это может занять до часа.
Вот итоговая таблица степени готовности стейков
3. Обжарьте стейк на сковороде из чугуна, углеродистой стали или тяжелой нержавеющей стали в горячем состоянии. Вероятно, для каждой стороны потребуется не более минуты.
4. Смазать стейк сливочным маслом, пока он не станет хрустящим и темным.
4. Стейк готов к употреблению. Обычно стейк не нужно отдыхать из-за медленного приготовления.
Посмотрите, как это делается, как Бабиш демонстрирует в характерном стиле ниже:
Стейк можно приготовить разными способами.Взгляните на все способы приготовления стейков, хорошие и странные, от су-видео до приготовления из замороженных продуктов.
Теперь вы довели свой стейк до совершенства, и остается только отличный картофель фри. Узнайте, как приготовить чипсы Heston Blumenthal тройного приготовления.
Вспомогательные светодиодные задние полосы с фонарями заднего хода
Описание продукта
Комплект дополнительных задних фонарей, который добавит безопасности вашему автомобилю.Отлично подходит для дополнительной безопасности и обзора на вашем автофургоне, прицепе, тележке для прицепа, грузовике, буксируемом транспортном средстве, автомобиле, UTV или чем-либо еще.
Этот комплект лучше других, потому что он дает вам гибкость во время установки с двумя планками одинаковой длины и электрическим соединением посередине, где он должен. Он также имеет красный ходовой свет и более яркий красный сигнал поворота / тормоза / аварийной сигнализации, а также отдельные яркие белые светодиоды для фонарей заднего хода. Обязательно просмотрите ссылку на видео, чтобы увидеть его в действии!
Каждая полоса имеет длину 31 1/4 дюйма, так что от конца до конца они имеют длину около 62 1/2 дюймов.
Стандартная установка электропроводки для автомобиля с красными указателями поворота или автомобиля с желтым светом, если вы подключаетесь к существующему световому фонарю прицепа или добавляете сумматор поворота / тормоза (не входит в комплект). Набор полосок универсален для различных типов установки. Подключите его к плоскому 5-му разъему, подключите к плоскому 4-му разъему и отдельно подключите обратный провод, или используйте дополнительный переходник с 5 на 7 контактов, чтобы подключить его к 7-контактному буксирному разъему (дополнительный адаптер 7/5 здесь) . он также поставляется с плоским удлинителем 5 с оголенным проводом и соединителями, если вы хотите подключить его непосредственно к задней части автомобиля.Каждая установка отличается, поэтому спланируйте установку и обратитесь за помощью к опытному специалисту. К сожалению, у нас нет инструкций по установке для конкретного автомобиля. Для некоторых установок могут потребоваться дополнительные расширения, просмотрите размеры продукта на изображениях.
ПРОСМОТРЕТЬ ОБЩИЕ РУКОВОДСТВА ПО УСТАНОВКЕ
Он будет работать без проводов вашего заднего фонаря или прицепа, он потребляет малую мощность. Обратите внимание, что фотографии горящих светодиодов сделать сложно. Это хорошее яркое дополнение к освещению, они не слишком ярки для движения позади вас, но хорошо видны днем и ночью.
Это комплект вспомогательного освещения, не предназначенный для основного освещения автомобиля.
Разработка тестов в реальном времени и с полосками с боковым потоком обратной транскрипции, рекомбиназы-полимеразы, амплификации для быстрого обнаружения вируса чумы мелких жвачных | Virology Journal
Штаммы вирусов
Все вирусы, использованные в этом исследовании, были сохранены в нашей лаборатории: вирус чумы мелких жвачных животных (PPRV) Nigeria 75/1; Вирус Orf (ORFV) / вакцина / CHA; вирусы оспы коз (GPV) AV40, вирусы оспы овец (SPV) Gulang2009; вирус ящура (ящур) / O / CHA; Ящур / A / CHA и FMDV / Asia I / CHA.
Подготовка образцов
Для приготовления лизатов тканей, содержащих PPRV, у трех здоровых овец брали образцы тканей печени, легких, желудка, почек, лимфатических узлов и кожи ( n = 18, по три каждой ткани). Затем готовили 10% (мас. / Об.) Тканевые суспензии (образцы ткани на один миллиграмм гомогенизировали с девятью объемами PBS с использованием MP FastPrep-24) путем гомогенизации образцов ткани в PBS. После кратковременного центрифугирования в образцы гомогенизированной ткани добавляли 10 4 TCID 50 PPRV Nigeria 75/1 и хранили при -80 ° C до использования.Известные положительные образцы PPRV ( n = 14) и известные отрицательные образцы ( n = 10), хранящиеся в нашей лаборатории, были подтверждены с помощью анализа RT-qPCR в реальном времени [19]. Тридцать два клинических образца, взятых из подозреваемых случаев ЧМЖ в провинции Ганьсу, Китай, и пять образцов, полученных от здоровых овец, которые были проверены с помощью анализа RT-qPCR для подтверждения наличия или отсутствия PPRV-РНК, также были протестированы с использованием нового разработан анализ RT-RPA.
Экстракция вирусной РНК
Общую РНК экстрагировали из образцов с использованием набора для высокочистых вирусных нуклеиновых кислот (Roche) в соответствии с инструкциями производителя и элюировали в конечном объеме 40 мкл.Экстрагированная РНК хранилась при -80 ° C до дальнейшего использования для всех анализов в этом исследовании.
Создание стандарта РНК
Сегменты гена PPRV N (354 п.н., от 528 п.н. до 881 п.н. X74443) были синтезированы Genewiz (Сучжоу, Китай) и клонированы в вектор pUC57 ниже промотора Т7, обозначенный как pPPRV / RPA. Плазмиду pPPRV / RPA экстрагировали с использованием набора Plasmid Mini Kit I (Promega, США), и плазмиду линеаризовали после сегментов гена PPRV N. Всего 1 мкг линеаризованного продукта использовали для транскрипции in vitro (набор Megascript®, Ambion, США) в соответствии с инструкциями производителя.Транскрибируемую РНК обрабатывали ДНКазой и очищали с использованием протокола очистки РНК (RNeasy Mini KIT, Qiagen, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Очищенную РНК количественно определяли с помощью Nanovue (GE lifescience, США) и хранили при -80 ° C до использования.
Праймеры и конструкция зонда и оптимизация для RPA
PPRV-специфические праймеры и зонды RPA, основанные на N-гене PPRV, были разработаны в соответствии с руководящими принципами RPA (комбинированное руководство для комплектов для амплификации ДНК Twist Amp®) от TwistDx (Кембридж, США) Великобритания).Праймеры и зонд были выровнены с консенсусной последовательностью N-гена X74443 (LII, Нигерия), L39878 (LII, Нигерия), EU267274 (LII, Нигерия), EU267273 (LI, Кот-д’Ивуар), AJ849636 (LIV, Турция), FJ905304 (LIV, Китай, Тибет), AY560591 (LIV, Индия Сунгри), AJ563705 (LIV, Турция), KJ867543 (LIII, Уганда) и KJ867544 (LIII, Оман). Все указанные выше последовательности гена PPRV N были извлечены из GenBank, и множественное выравнивание последовательностей генных последовательностей было разработано вручную на основе гена N PPRV в соответствии с рекомендацией TwistDx (Кембридж, Великобритания). Все праймеры и зонды были синтезированы Sangon Biotech (Шанхай, Китай). Последовательности всех праймеров и зонда показаны в таблице 1. Чтобы определить наиболее эффективную пару праймеров для анализа PPRV в реальном времени RT-RPA, три прямых праймера (от Fe1 N до Fe3 N) и обратные праймеры (от Re1 N до Re3 N), нацеленные на различные области гена N, были разработаны на основе выравнивания всех доступных последовательностей гена PPRV N (таблица 1). Девять различных комбинаций праймеров (например, Fe1 N / Re1 N; Fe1 N / Re2 N; Fe1 N / Re3 N; Fe2 N / Re1 N; Fe2 N / Re2 N; Fe2 N / Re3 N; Fe3 N / Re1 N; Fe3 N / Re2 N; Fe3 N / Re3 N) затем тестировали с зондом (Pe) в анализе PPRV в реальном времени RT-RPA.
Анализ RT-qPCR в реальном времени
Анализ RT-qPCR в реальном времени выполняли в термоциклере Agilent Technologies Stratagene Mx3005P (Life Technologies, США) с использованием набора Superscript III / Platinum Taq One-step RT-qPCR (Invitrogen, США) [19]. Реакции готовили в виде 25 мкл реакционного объема, содержащего 2 мкл экстрагированной РНК, 12,5 мкл реакционной смеси Superscript III / Platinum Taq для одностадийной RT-qPCR, 1 мкл смеси ферментов Superscript III / Platinum Taq для одностадийной RT-qPCR, 0.5 мкл эталонного красителя ROX в качестве пассивного эталона, 5 пмоль зонда Такмана и 10 пмоль прямого и обратного праймеров. Использовали следующий тепловой профиль: начальная обратная транскрипция при 45 ° C в течение 30 минут, затем при 95 ° C в течение 10 минут и 40 циклов амплификации (15 с при 94 ° C и 1 мин при 60 ° C). Данные были проанализированы с использованием программного обеспечения Mx3005P System.
Анализ RT-RPA в реальном времени
Анализ RT-RPA в реальном времени выполняли в объеме 50 мкл с использованием набора Twist Amp® exo RT (TwistDx, Кембридж, Великобритания), который состоял из 29 штук.5 мкл буфера для регидратации, 2 мкл матричной РНК, 2,1 мкл прямого и обратного праймеров (10 мкМ, Beijing Genomics Institute, Китай), 0,3 мкл экзо-зонда RPA (10 мкМ, Sangon Biotech, Китай), 11,8 мкл ddH 2 O и 2,5 мкл ацетата магния (280 мМ). Оптимальные условия реакции были определены после тестирования различных температур инкубации (от 39 до 42 ° C), а также различных концентраций матрицы (от 0,5 мкл до 2 мкл) и ацетата магния (от 1 мкл до 2,5 мкл). Измерения флуоресценции с использованием канала FAM проводили в течение 20 мин при оптимизированной температуре (40 ° C).Интенсивность флуоресценции ФАМ определяли каждые 20 с. Образец считался положительным, если все повторы были на три с половиной стандартных отклонения (3,5 SD) выше фона в течение определенного диапазона времени (то есть после 19-20 минут амплификации). Был использован диапазон порогового времени от 0 до 4 мин и 30 с.
Тест RT-RPA на полосе с боковым потоком
Анализ RT-RPA на полосе с боковым потоком (анализ LFS RT-RPA) проводили с использованием набора Twist Amp® nfo от TwistDx (Кембридж, Великобритания) в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, использовали обратный праймер с 5′-биотиновой меткой. Зонд состоит из вышележащего участка (30 п. н.), несущего антигенную метку 5′-FAM, которая соединена через спейсер THF с соседним нижележащим олигонуклеотидом (15 п.н.), несущим C3-спейсер (группу, блокирующую удлинение полимеразы) на его 3 ‘конец. Все олигонуклеотиды в этом исследовании были синтезированы Sangon Biotech (Шанхай, Китай). Выделенная РНК PPRV сначала подвергалась обратной транскрипции в кДНК перед проведением реакции RPA с помощью набора Twist Amp® nfo, поскольку набор не содержал обратной транскриптазы.Синтез кДНК проводили в 20 мкл реакционной смеси с использованием набора для синтеза первой цепи кДНК транскриптора (Roche, Германия) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, 1 мкл праймера заякоренного олиго добавляли к 12 мкл очищенной РНК. После инкубации при 65 ° C в течение 10 мин смесь немедленно помещали на лед на 2 мин и смесь, содержащую 4 мкл буфера RT (5 ×), 0,5 мкл ингибитора протекторной РНКазы, 2 мкл смеси дезоксинуклеотидов и 0,5 мкл транскрипторной обратной транскриптазы. добавлен. Реакцию проводили при 50 ° C в течение 60 минут и 85 ° C в течение 5 минут.
Затем проводили реакции PPRV RPA nfo в объеме 50 мкл с помощью набора Twist Amp® nfo (TwistDx, Великобритания), содержащего 420 нМ nfo RPA-праймеров, 15 нМ зондов RPA, 2,5 мкл 280 мМ MgAc, 2 мкл матрицы кДНК и 1 × буфер регидратации. Реакцию RPA проводили в нагревательном блоке при оптимизированной температуре (39 ° C) в течение 20 мин, а затем для обнаружения ампликонов использовали индикаторные полоски Hybridetect 2T lateral flow stripe (LFS) (Milenia Biotec GmbH, Германия). Один мкл амплифицированного продукта разбавляли в 99 мкл буфера для анализа (забуференный трис физиологический раствор).Затем полоски помещали в смесь и инкубировали в вертикальном положении. Окончательный результат считывали визуально после инкубации в течение 2 мин при комнатной температуре. Тестируемый образец считался положительным, когда были видны как линия обнаружения (линия тестирования образца), так и контрольная линия (линия против кроличьих антител). Тестируемый образец считался отрицательным, если была видна только контрольная линия.
Ампликоны также могут быть проанализированы с помощью электрофореза в 2% агарозном геле (Agarose Broad Range, Германия), окрашенного бромидом этидия после очистки с помощью набора для очистки PCR (Qiagen, Германия) для дальнейшего подтверждения результата тестирования.
Чувствительность и специфичность анализов PPRV RT-RPA и LFS RT-RPA в реальном времени
Для проверки динамического диапазона анализа RT-RPA PPRV в реальном времени стандартную РНК in vitro, транскрибированную из плазмиды pPPRV / RPA, разводили в 10 раз. -сложите с использованием ddH 2 O, в диапазоне от 10 6 до 10 1 копий генома на реакцию, а затем протестировали с помощью анализа PPRV в реальном времени RT-RPA. Каждый запуск повторялся шесть раз. Чувствительность анализа PPRV в режиме реального времени RT-RPA дополнительно оценивали с использованием образцов с добавками, как описано выше.Чувствительность анализа PPRV LFS RT-RPA определяли путем проведения 10-кратных серийных разведений (от 10 6 до 10 1 копий генома на реакцию) стандартной РНК. Кроме того, амплифицированные продукты в реакции PPRV LFS RT-RPA также тестировали путем последующей визуализации с помощью электрофореза в агарозном геле. Специфичность анализов PPRV в реальном времени RT-RPA и LFS RT-RPA оценивалась с использованием серотипов O, A и Asia 1, ORFV, GPV и SPV, которые вызывали клинические признаки, аналогичные PPR у мелких жвачных.
Статистический анализ
Полулогарифмический регрессионный анализ чувствительности анализа PPRV RT-RPA в реальном времени проводился с использованием программного обеспечения PRISM 5.0 (GraphPad Software, США), а пробит-анализ выполнялся с помощью программного обеспечения Statistica (StatSoft, Гамбург, США). Германия). Сравнение между значениями порогового времени RT-RPA в реальном времени и значениями пороговых значений цикла RT-qPCR в реальном времени для обнаружения PPRV проводили с помощью анализа линейной регрессии с использованием программного обеспечения Excel.
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Strip — Руководство блендера
Панель регулировки
Панель Adjust используется для управления визуальными свойствами полос.
Композит
- Смесь
- Режим наложения полосы с нижними каналами.
- Непрозрачность
- Установите непрозрачность (альфа) полосы.
Преобразовать
- Смещение изображения
- Используется для перемещения рамок по осям X и Y. Кроме того, он отключает автоматическое масштабирование изображения.
- Обрезка изображения
- Используется для обрезки исходного изображения, используйте верхний , левый , Нижний и Правый , чтобы указать, какая часть изображения будет обрезана.
Видео
- Стробоскоп
- Для отображения только каждого n-го кадра. Например, если вы установите это значение 10, полоса будет отображать только кадры 1, 11, 21, 31, 41… источника. Строб — это значение с плавающей запятой — таким образом вы можете получить эффект строба, синхронизированный точно с долей, например, используя нецелочисленные значения.
- Реверс
- Воспроизводит полосу в обратном направлении (время).
- Деинтерлейс
- Удаляет поля в видеофайле. Например, если это аналоговое видео и в нем есть четные или нечетные поля чересстрочной развертки.
- X Флип
- Зеркально отображает изображение по оси X (слева направо).
- Y-образный вырез
- Зеркально отображает изображение по оси Y (сверху вниз).
Цвет
- Насыщенность
- Увеличить или уменьшить насыщенность изображения.
- Умножить
- Умножает цвета на это значение.
Это увеличит яркость.
- преобразовать в число с плавающей запятой
- Преобразует ввод в данные с плавающей запятой.
Звук
- Объем
- Громкость звука.Это значение, даже если оно анимировано, будет отражено в форме волны.
- Отключение звука (значок динамика)
- Полоса не воспроизводит звук.
- Шаг
- Коэффициент скорости воспроизведения. Это значение повлияет на длину полосы, которая не будет представлена на шкале времени.
- Сковорода
- Используется для панорамирования звука левого и правого каналов. Работает только для моно источников. Значения могут быть от -2 до 2, где 0 означает спереди / по центру, -1 означает слева и 1 справа.В случае многоканального звука (тыловые колонки) вы можете панорамировать на те, у которых более высокие значения: -2, 2 — назад. Таким образом, это значение в основном представляет собой угол, под которым играется.
- Форма сигнала дисплея
- Отобразить приблизительную форму волны звукового файла внутри звуковой полосы.
Форма волны отражает объем полосы и анимацию с использованием ключевых кадров.
- Моно
- Сведение всех аудиоканалов в один.
Панель времени
Панель «Время» используется для управления источником и положением полосы на временной шкале.
- Замок (значок замка)
- Предотвращает перемещение полосы (находится в заголовке панели).
- Канал
- Изменяет номер канала или строку полосы.
- Старт
- Изменяет начальный номер кадра полосы, аналогично выбору и перемещению полосы.
- Продолжительность
- Изменяет длину в кадрах полосы. Это работает путем изменения конечной рамки, это то же самое, что выбрать и переместить правую ручку полосы.
- Конец
- Задает время окончания и номер конечного кадра для полосы.
- Начало / конец смещения полосы
- Может использоваться для удлинения полосы за пределы конечного кадра путем повторения последнего кадра.
Или его можно использовать для укорочения полосы, как если бы вы обрезали крайнюю рамку. Это то же самое, что и регулировочные ручки планки.
- Удержание начала / конца смещения
- Смещение содержимого неразрезанной полосы.
- Ползунок
- Положение точки воспроизведения относительно начала активной полосы.
Панель источника
Панель Source используется для управления источниками полосы такие как имя файла и путь к файлу, а также различные методы интерпретации этих файлов.
- Путь
- Каталог, содержащий исходный файл. Когда файл перемещается, его можно обновлять, а не заново создавать полосу.
- Файл
- Имя исходного файла. Для полос изображений, показывающих последовательность изображений, это будет отличаться для каждого кадра.
- Изменить данные / файлы
- То же, что и поля Путь и Файл , но на этот раз объединены, чтобы открыть Браузер файлов, чтобы
найдите файл (ы), который вы ищете.
Такой же как .
- Предварительный просмотр MPEG
- Только видеопленка — используйте поле Preseek, чтобы указать Blender’у оглянуться назад и составить изображение на основе указанного количества предыдущих кадров (например, 15 для MPEG-2 DVD).
- Цветовое пространство
- Чтобы указать цветовое пространство исходного файла.
- Альфа-режим
Если исходный файл имеет альфа-канал (прозрачность), вы можете выбрать:
Прямая альфа или предварительно умноженная альфа
- Индекс потока
- Только видеопоток — для файлов с несколькими потоками фильмов используйте поток с заданным индексом.
- Разрешение
- Разрешение вывода изображения активной полосы.
Варианты звуковых полос
- Звук
- Меню блока данных для выбора звука.
- Путь
- Путь к звуковому файлу, используемому этим меню блока данных.
- Пакет
- Упаковать звук в blend-файл.
- Кэширование
- Звуковой файл декодируется и загружается в ОЗУ.
Smoked NY Strip с обратным шепталом
Итак, вам нравится стейк со сбалансированным вкусом дыма, приготовленный до совершенства — идеальный средне-прожаренный?Тогда попытка выкурить стейк и прикончить его обратным шепталом может быть именно тем решением, которое вы ищете.В мире барбекю популярность обратного шептала растет, и легко понять, почему. Его легко использовать, и его сложно потерпеть неудачу.
Вы начинаете с медленного копчения мяса до внутренней температуры около 115 градусов, затем вы обжигаете его на горячем огне, чтобы поднять его до желаемой температуры, применяя в конце хрустящую дымную карамелизацию.
Обратное обжаривание имеет несколько преимуществ: лучший контроль нагрева, так как вы можете приготовить стейк до точной степени прожарки. Кроме того, мясо готовится более равномерно.А поскольку вы отдыхаете между копчением на медленном огне и обжариванием на сильном огне, вы можете подавать его горячим на гриле.
Первое, что вам нужно сделать, это обрезать стейк. Я использовал полоску NY для этого поста. Обрежьте кость и все жировые участки. Если на стейке осталась серебряная корка, удалите и ее. Затем сформируйте его так, чтобы он выглядел как красивый, чистый стейк правильной формы. Внешний вид тоже важен, а не только вкус.Приправьте любимым стейком или протертым говядиной. Я, конечно, использую Big Swede BBQ Badass Beef Boost. Он придает стейку приятный цвет и немного нагревает — мне так нравится. Дайте стейку немного попотеть — это позволит соли и специям проникнуть в стейк, а также вытянет из него часть воды. Пока вы ждете, пока стейк потеет, подготовьте курильщика и установите температуру 225 градусов по Фаренгейту. Для стейков я использую фруктовую древесину, например, яблоко или вишню. Это придает стейку приятный цвет и сбалансированный профиль дыма.
Вставьте зонд или проверьте термометром, убедитесь, что стейк не пережарился в коптильне.
Я курю его до тех пор, пока стейк не достигнет внутренней температуры 115 градусов по Фаренгейту. Стейк также должен иметь темно-красный дымчатый вид.
Теперь вы можете дать ему отдохнуть в течение 5-6 минут, пока вы разогреваете гриль. Вы будете поджаривать стейк около минуты с каждой стороны, поэтому постарайтесь сделать гриль как можно более горячим.Также можно сделать обратное шептание на чугунной сковороде или сотейнике.
Один из способов дать отдых стейку — снять его с гриля, переложить на разделочную доску, а затем положить под большой кусок фольги.