3Д т: {{ ‘add_block.title’ | t }}

Содержание

Что такое 3D принтеры и чем отличаются между собой

Мир техники с каждым годом претерпевает ряд изменений. Появляются все новые и новые модели. Такие новшества коснулись и 3Д-принтеров. Сейчас в продаже имеются как домашние, профессиональные, так и промышленные разновидности. Они имеют отличия, которые будут подробно рассмотрены.

Что такое 3D-печать

3Д-печать представляет собой процесс аддитивного (послойного) создания объектов, с применением твердого материала, на основе CAD-модели. Такая трехмерная модель STL-формата, отправляется на специальный принтер, который слой за слоем создает реальный объект из разных материалов.

Другое название 3Д-печати – аддитивное производство, прямое цифровое производство, выращивание.

Принтер для 3d печати может напечатать многие предметы, такие как колпачок для ручки, прищепки для белья, фурнитуру для мебели, пластиковые игрушки на елку, игрушки для детей и т.д. Они легко изготовят пластиковый чехол для телефона и даже оригинальные шахматные фигуры.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Самым крупными являются промышленные модели, профессиональные устройства чуть меньше, и домашние 3Д принтеры считаются самыми небольшими.

Особенности профессиональных принтеров

Профессиональный 3d принтер выполняет те же функции, что и фотоаппараты и видеоаппаратура для профессионалов. То есть они облегчают работу фотографов и тех, кто занимается видеосъемкой.

У такого оборудования четко просматривается его назначение. Устройства могут делиться на промышленные, ювелирные, кулинарные, стоматологические, медицинские и т.д. Так, например, стоматологические принтеры предназначены только для стоматологической деятельности – для печати коронок, протезов и т.д.

Данные устройства имеют свои основные отличительные качества:

  1. Высокая точность работы и детализированность.
  2. Высокая производительность.
  3. Скоростная печать.
  4. Наличие дополнительных возможностей.
  5. Достаточно высокая стоимость.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Так, у принтера FDM нередко присутствуют дополнительные печатные головки. Промышленный 3d принтер может даже выпускать небольшие серии готовой продукции, а также изготавливать высококачественные образцы для тестирования и презентаций.

Профессиональное оборудование обладает увеличенной рабочей камерой и областью построения. Промышленные устройства бывают намного крупнее остальных моделей.

Напечатанные с помощью данной техники объекты обладают высокой точностью и качеством.

В каких промышленных областях применяют 3D принтеры

Такие принтеры используют в следующих областях:

  • проектирование электроники бытового назначения;
  • при разработке упаковочного материала;
  • в ювелирном направлении;
  • в игрушечном производстве;
  • в аэрокосмической промышленности;
  • производство автомобилей и т.д.

Отдельно стоит отметить применение данных устройств в медицинской сфере.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Уже на протяжении нескольких лет с их помощью делается протезирование зубов. В отличие от прежних технологий, этот способ дешевле и надежнее, так как обладает высокой точностью. Еще одна сфера в медицине, где применяется техника, это 3D-прототипирования костей и суставов для создания имплантов.

Модели профессиональных 3D принтеров

Профессиональные устройства могут отличаться своим назначением, технологией и другими показателями.

Вот только несколько моделей, которые пользуются спросом у потребителей:

  1. Stratasys Objet 24 – профессиональный принтер для высокодетализированной печати. В основу производства легла технология PolyJet 3D printing. Ее применяют для печати моделей для функционального тестирования. Устройство предпочитают дизайнеры и инженеры.
  2. 3D systems Projet 3600 Dental – с его помощью можно построить экстремально четкие и гладкие детали. Аппарат приобретают стоматологии и ювелирные заведения.
  3. MAKERBOT REPLICATOR Z18, LeapFrog Xeed и StarLight 3D – применяются в ювелирном деле.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Относятся к профессиональным принтерам FDM.

Как выбрать профессиональный вариант

При выборе модели профессионального плана нужно придерживаться некоторых условий:

  1. На первом месте стоит определение задач, которые должно будет выполнять данное оборудование. Для пластиковых прототипов понадобятся одни модели, для восковок – совершенно другие, при помощи третьих можно создавать сверхточные объекты.
  2. Предусмотрение требований по допускам, что может повлиять на точность печати.
  3. Ориентируйтесь и на свой бюджет.

FDM 3D–принтеры начального уровня

В данной категории представлены самые бюджетные варианты. Основу процесса печати составляют послойные направления FDM (Fused deposition modeling). Под воздействием высоких температур пластиковая нить плавится и наносится тонкими слоями создавая объемную модель. В недорогих моделях присутствует одно сопло для выдавливания нитей.

Наиболее известной среди бюджетных фотополимерных LCD 3D-принтеров, является модель Anycubic Photon Zero.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Такие устройства в сравнении с профессиональными работают медленно, чтобы напечатать один объект, потребуется несколько часов. Кроме того, номенклатура материала ограничена.

Среди достоинств принтеров начального уровня:

  1. Небольшая цена.
  2. Хорошо подходят для новичков, желающих познакомиться с работой данных устройств.
  3. Просты в установке и настройке

Недостатки:

  1. У такого принтера нет закрытой камеры.
  2. Конструкция ненадежна по сравнению с профессиональными устройствами, часто такая техника состоит из стальной рамы
  3. Отсутствует закрытый корпус, поэтому не все виды пластика используются для работы на устройстве. Это преимущественно PLA, SBS, PETG.

Заключение

При желании приобрести 3D-принтер вы всегда можете обратиться за помощью к специалистам. Чаще всего любая крупная компания по продаже подобной техники располагает командой грамотных консультантов, которые расскажут все о представленных моделях и помогут подобрать самый оптимальный вариант.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Система трехмерного моделирования КОМПАС-3D

КОМПАС-3D

— это российская система трехмерного проектирования, ставшая стандартом для тысяч предприятий и десятков тысяч профессиональных пользователей.

КОМПАС-3D широко используется для проектирования изделий основного и вспомогательного производств в таких отраслях промышленности, как машиностроение (транспортное, сельскохозяйственное, энергетическое, нефтегазовое, химическое и т.д.), приборостроение, авиастроение, судостроение, станкостроение, вагоностроение, металлургия, промышленное и гражданское строительство, товары народного потребления и т. д.

Актуальная версия: КОМПАС-3D v19

Подробнее о проектах пользователей КОМПАС-3D

Почему предприятия и пользователи выбирают КОМПАС-3D:

  • Наличие необходимой функциональности
  • Проектирование изделий любой сложности
  • Качественное оформление документации по ЕСКД или СПДС
  • Автоматизация отраслевых задач
  • Простота освоения
  • Бесплатная техническая поддержка
  • Гибкая лицензионная политика
  • Льготное замещение зарубежных САПР
  • Встраивание в PLM-среду предприятия
Подробнее об основных возможностях КОМПАС-3D

Полностью импортонезависимая система

В основе КОМПАС-3D лежит российское геометрическое ядро C3D (создано C3D Labs, дочерней компанией АСКОН) и собственные программные технологии.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Современный настраиваемый интерфейс

Не только снижает нагрузку на зрение и сокращает лишние действия, но и обеспечивает полную концентрацию внимания пользователя на рабочем документе.

КОМПАС-3D поддерживает следующие виды моделирования:

Поддержка ГОСТ 2.052-2015 «Электронная модель изделия»

КОМПАС-3D содержит инструменты создания в 3D-модели необходимых и достаточных данных для ее производства: размеры, элементы обозначения (осевые линии, резьбы, базы, допуски форм и т. д.), технические требования, неуказанная шероховатость. Это значит, что КОМПАС-3D уже сейчас позволяет отказаться от электронных чертежей изделия.

Обмен данными с другими САПР

Возможности КОМПАС-3D по обмену информацией с другими CAD-системами:

  • экспорт и импорт (с последующим редактированием) 3D-геометрии и данных о модели через форматы STEP, ACIS, IGES, Parasolid и др.;
  • экспорт и импорт (с последующим редактированием) 2D-геометрии через форматы DWG и DXF;
  • прямой импорт (с последующим редактированием) файлов наиболее распространенных CAD-систем (SolidWorks, Autodesk Inventor, Solid Edge, Creo (Pro/Engineer), NX (Unigraphics), Catia).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Расчеты и анализ

КОМПАС-3D позволяет выполнять следующие инженерные расчеты:

  • расчет массо-центровочных характеристик (2D/3D)
  • расчет пружин и механических передач (2D/3D)
  • динамический анализ поведения механизмов (3D)
  • экспресс-анализ прочности (3D)
  • топологическая оптимизация изделия (3D)
  • геометрическая оптимизация (3D)
  • анализ течения жидкости и газа (3D)
  • анализ теплопроводности и естественной конвекции (3D)
  • расчет размерных цепей (2D)

Качественное оформление конструкторской и проектной документации

Одно из главных преимуществ КОМПАС-3D — оформление документации в полном соответствии с правилами ЕСКД или СПДС. Это подтверждают пользователи других CAD-систем, выполняя 3D-модели изделий в своей САПР, а чертежи, спецификации, схемы, ведомости — в КОМПАС-3D.

Поиск и исправление ошибок в чертежах и 3D-моделях

КОМПАС-3D позволяет осуществлять проверку документов на соответствие стандартам оформления по ЕСКД (например, размещение текста или допустимое расстояние между размерными линиями), а также проверку моделей на технологичность (например, расположение отверстий или разрешенные значения шероховатости).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Всего доступно около 200 различных проверок, которые улучшат качество разрабатываемых моделей и документации и помогут исправить ошибки до передачи изделия в производство.

Работа с большими сборками

Создавать изделия любой сложности стало возможным, благодаря реализованной в 2018 году концепции быстродействия работы КОМПАС-3D. Ускорено более 30 процессов, внедрены специальные приёмы работы с большими сборками, используются необходимые ресурсы аппаратной части (процессоров, видеокарт).

Работы над производительностью системы продолжаются, каждая новая версия системы будет быстрее предыдущей.

Подробнее о быстродействии

Объектное моделирование

Функциональность любого программного продукта направлена на автоматизацию и выполнение какой-либо задачи за минимальное время. В КОМПАС-3D спроектировать изделие быстрее можно с помощью объектного моделирования, при котором составные части изделия создаются не с помощью эскизов и формообразующих операций, а с помощью готовых типовых «объектов».3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} К таким объектам в КОМПАС-3D относятся крепёжные элементы, пружины, валы, механические передачи, трубопроводы, металлоконструкции, электрические провода и многое другое.

Подробнее об объектном моделировании в машиностроении, приборостроении и строительстве.

Методики проектирования

КОМПАС-3D поддерживает несколько методик проектирования изделия. Наиболее перспективная с точки зрения скорости — методика нисходящего проектирования (МНП или «сверху-вниз»). Она заключается в проектировании, начиная с уровня головной сборки и заканчивая уровнем деталей.

Применение МНП обеспечивает параллельную разработку составных частей изделия несколькими исполнителями, а также существенно сокращает время на внесение изменений в проект с помощью управления компоновкой изделия.

Интеграция с системами управления жизненным циклом изделия

После завершения проектирования жизненный цикл изделия (ЖЦИ) продолжается этапами технологической подготовки производства, испытания, изготовления, эксплуатации изделия и т.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} д. Для автоматизации этих этапов необходима система управления ЖЦИ, система PLM-класса. КОМПАС-3D содержит необходимые инструменты для встраивания (интеграции) в любые существующие PLM-среды. Наиболее тесная интеграция организована с системой управления инженерными данными ЛОЦМАН:PLM (разработка АСКОН).

Только начинаете осваивать КОМПАС-3D? Пройдите базовый курс обучения в офисах компании АСКОН. Для самостоятельного изучения воспользуйтесь интерактивными азбуками по 2D и 3D, приёмами работы, справочной системой, подсказками в процессе команд.

Подробнее об освоении КОМПАС-3D

За последние три года КОМПАС-3D увеличил темпы развития — в рамках одной версии появляется более 100 новинок (ранее этот показатель был на уровне 30-35 новинок). За последние пять лет вышло более 300 новинок, большинство из которых были разработаны на основе предложений пользователей.

Отработку предложений и любых инцидентов по продукту ведет Служба технической поддержки АСКОН.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Техническое сопровождение всех лицензионных пользователей КОМПАС-3D предоставляется бесплатно через Личный кабинет сайта технической поддержки.

Хотите узнать, как решить именно ваши задачи? Обратитесь в ближайшие офисы компании АСКОН и партнёров.

Скачать пробную версию

3D-моделирование танка Т-34 в программе Tinkercad

Танк Т-34 смог существенно повлиять на ход Великой Отечественной войны, благодаря уникальным конструкторским решениям советских инженеров-изобретателей. Он был основным и самым массовым танком Красной Армии с 1942 по 1947 гг.

Современные технологии 3D-печати позволяют создать модель танка с большой точностью, повторив в ней много мелких деталей.

Кому может быть интересен этот курс?

  • Руководителям детских центров, которых привлекает направление «3D-моделирование». Этот курс является хорошим продолжением курса «Живой робот Валли».
  • Предпринимателям, которые хотят открыть кружок по робототехнике и находятся в поиске методических материалов.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}
  • Если вы хотите заинтересовать своих детей или учеников 3D-моделированием, этот курс сможет по-настоящему увлечь и познакомить с основными инструментами программы Tinkercad.
  • Если ваши ученики уже знакомы с 3D-моделированием, этот курс будет хорошей практикой для отработки навыков.

Tinkercad — простая в освоении программа для 3D-моделирования

  • Возможность управлять процессом моделирования только при помощи мыши делает эту программу доступной для детей с 7 лет.
  • Tinkercad — бесплатная программа.
  • Она находится на сервере, что очень удобно при совместной работе под одним логином.

Курс будет интересен детям разного возраста и уровня подготовки

Программа курса рассчитана на 10 занятия по 1.5 часа и оформлена в виде инструкций для пошагового моделирования.

Для каждого урока подготовлена презентация.

Все слайды содержат список шагов моделирования, изображение детали танка и скриншот ключевого шага.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Методические материалы курса позволяют проводить занятия по трём различным сценариям:

  • «Вместе шаг за шагом»
  • «Вместе по слайдам»
  • «Работаем самостоятельно».

Педагог может выбрать тот или иной сценарий в зависимости от возраста и уровня подготовки учеников. Все технические и методические рекомендации подробно изложены в прилагаемом к курсу файле.

Танк Т-34

Успешность проекта танка Т-34 была предопределена применением новейшего высокоэкономичного дизель-мотора В-2, благодаря которому машина получила высокую удельную мощность, обеспечившую в течение всей Великой Отечественной войны абсолютное превосходство танка в проходимости, манёвренности и подвижности.

Легендарная популярность танка Т-34 способствует и успешности проведения этого курса в детском центре.

Какой мальчишка не мечтает самостоятельно смоделировать и забрать себе распечатанную на 3D-принтере модель Т-34?

Курс прошел апробацию

Курс проводился  в группах детей разного возраста: от 7 до 12 лет.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Всего по программе курса занимались 35 ребят разного уровня подготовки, от новичков до опытных учеников.

Все уроки курса «Легендарный танк Т-34» проверены на практике.

Что необходимо для первого старта?

  • Помещение для занятий со столами и стульями.
  • Компьютеры по количеству учащихся с установленным браузером и мышкой.
  • 3D-принтер (FDM/50 мк/подогреваемый стол/размер области печати не менее 120х100х100 мм, например Anycubic i3 Mega).
  • Wi-Fi роутер с выходом в интернет.
  • Пластик PLA.
  • Проектор для презентации.

Более подробные характеристики принтера и настройки печати содержаться в материалах курса.

Требуемый уровень квалификации педагога

  • Для проведения курса «Легендарный танк Т-34» педагог должен:
  • Обладать базовыми знаниями и умениями в области 3D-моделирования.
  • Хорошо знать возможности программы Tinkercad.
  • Уметь подготавливать модели для печати, настраивать качество печати.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

У вас есть возможность получить бесплатную консультацию по вопросам проведения курса.

Что входит в состав покупки?

  • Презентации для проведения 10 занятий длительностью 1 час 30 минут с подробной инструкцией по моделированию.
  • Методическая и техническая информация для подготовки и проведения курса
  • STL-модели всех деталей танка.
  • План курса с кратким содержанием и результатом каждого урока.
  • Консультационная поддержка по запуску и проведению курса в течение 6 месяцев после его приобретения.

Автор курса — Андрей Ананьев

Педагог робототехники, методист, автор-разработчик образовательных программ и программного обеспечения.

Сертифицированный психолог, психотерапевт с более чем 10-летним опытом работы с детьми.

Стоимость методического комплекта

3D-моделирование и визуализация

Определение понятий «3D-моделирование» и «визуализация»

Трехмерная графика или 3D-моделирование – компьютерная графика, сочетающая в себе приемы и инструменты, необходимые для создания объемных объектов в техмерном пространстве.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Под приемами стоит понимать способы формирования трехмерного графического объекта – расчет его параметров, черчение «скелета» или объемной не детализированной формы; выдавливание, наращивание и вырезание деталей и т.д.

А под инструментами - профессиональные программы для 3D-моделирования. В первую очередь – SolidWork, ProEngineering, 3DMAX, а также некоторые другие программы для объемной визуализации предметов и пространства.

Объемный рендеринг – это создание двухмерного растрового изображения на основе построенной 3d-модели. По своей сути, это максимально реалистичное изображение объемного графического объекта.

Области применения 3D-моделирования:
  • Реклама и маркетинг

Трехмерная графика незаменима для презентации будущего изделия. Для того, чтобы приступить к производству необходимо нарисовать, а затем создать 3D-модель объекта. А, уже на основе 3D-модели, с помощью технологий быстрого прототипирования (3D-печать, фрезеровка, литье силиконовых форм и т.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} д.), создается реалистичный прототип (образец) будущего изделия.

После рендеринга (3D-визуализации), полученное изображение можно использовать при разработке дизайна упаковки или при создании наружной рекламы, POS-материалов и дизайна выставочных стендов.

  • Городское планирование

С помощью трехмерной графики достигается максимально реалистичное моделирование городской архитектуры и ландшафтов – с минимальными затратами. Визуализация архитектуры зданий и ландшафтного оформления дает возможность инвесторам и архитекторам ощутить эффект присутствия в спроектированном пространстве. Что позволяет объективно оценить достоинства проекта и устранить недостатки.

  • Промышленность

Современное производство невозможно представить без допроизводственного моделирования продукции. С появлением 3D-теxнологий производители получили возможность значительной экономии материалов и уменьшения финансовых затрат на инженерное проектирование.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} С помощью 3D-моделирования дизайнеры-графики создают трехмерные изображения деталей и объектов, которые в дальнейшем можно использовать для создания пресс-форм и прототипов объекта.

  • Компьютерные игры

Технология 3D при создании компьютерных игр используется уже более десяти лет. В профессиональных программах опытные специалисты вручную прорисовывают трехмерные ландшафты, модели героев, анимируют созданные 3D-объекты и персонажи, а также создают концепт-арты (концепт-дизайны).

Вся современная киноиндустрия ориентируется на кино в формате 3D. Для подобных съемок используются специальные камеры, способные снимать в 3D-формате. Кроме того, с помощью трехмерной графики для киноиндустрии создаются отдельные объекты и полноценные ландшафты.

  • Архитектура и дизайн интерьеров

Технология 3д-моделирования в архитектуре давно зарекомендовала себе с наилучшей стороны. Сегодня создание трехмерной модели здания является незаменимым атрибутом проектирования.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} На основании 3d модели можно создать прототип здания. Причем, как прототип, повторяющий лишь общие очертания здания, так и детализированную сборную модель будущего строения.+

Что же касается дизайна интерьеров, то, с помощью технологии 3d-моделирования, заказчик может увидеть, как будет выглядеть его жилище или офисное помещение после проведения ремонта.

С помощью 3D-графики можно создать анимированного персонажа, «заставить» его двигаться, а также, путем проектирования сложных анимационных сцен, создать полноценный анимированный видеоролик.

Сияющая тональная основа TimeWise 3D™ | Слоновая кость Т 120

1 fl. oz.

1 200,&nbsp₽

Написать отзыв

Тональная основа становится второй кожей!
  • Оттенок идеально ложится, подстраивается под ваш тон кожи благодаря технологии IntelliMatch.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Деликатно перекрывает все несовершенства.
  • Содержит эксклюзивный комплекс Age Minimize 3D™: защищает от воздействия свободных радикалов, замедляет старение, сохраняет молодость кожи.
  • До 12 часов стойкости
  • Невесомое покрытие и безупречный финиш
  • Кожа мгновенно приобретает сияющий вид
  • Обеспечивает 12 часов увлажнения
  • Невесомое покрытие маскирует все недостатки
  • Содержит светоотражающие минералы
  • Содержит масло жожоба для длительного комфорта

Рекомендованная розничная цена.

  • Описание
  • Ключевые ингредиенты
  • Преимущества

Подбор оттенка стал прост, как никогда! Благодаря технологии адаптирования оттенка тонального средства под тон вашей кожи и новой схеме подбора по подтонам: холодному, теплому и нейтральному.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

  • Содержит светоотражающие минералы
  • Содержит масло жожоба для длительного комфорта
  • Комплекс Age Minimize 3D:
    - Витамин В3 - антиоксидант, ускоряет обновление кожи
    - Антивозратсные пептиды - повышают тонус кожи и уменьшают морщины
    - Инкапсулированный ресвератрол - антиоксидант, стимулирует выработку коллагена и улучшает тон кожи
Новая тональная основа — это ваш ключ к безупречному образу:
  • Уменьшает видимость несовершенств на коже: покраснений, черных точек, пигментации.
  • Макияж выглядит свежим до 12 часов.
  • Кожа остается увлажненной до 12 часов.
  • Кожа выглядит моложе и здоровее.
  • После нанесения нет ощущения липкости.
  • Не забивается в поры и в морщинки.

Написать отзыв

Обязательные поля помечены *

Выберите оценку при помощи клавиш со стрелками "Вправо" и "Влево"

Трехмерное УЗИ

Трехмерное УЗИ для беременных

Трехмерное УЗИ (3D, 4D) позволяет получить объемное изображение плода.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Это значительно повышает качество диагностики, а родителям позволяет увидеть будущего малыша. С помощью трехмерного УЗИ они могут сами определить пол ребенка, посмотреть на него в движении, увидеть его личико и даже пересчитать каждый пальчик на ручках.

Двухмерное и трехмерное УЗИ

Двухмерное УЗИ — изображение на плоскости, трехмерное — изображение в объеме. Аппараты для двухмерного и трехмерного УЗИ отличаются только наличием особых датчиков и встроенного модуля.

Уважаемые пациенты, если на предыдущем УЗИ вам уже диагностирована двойня, при записи на трехмерное УЗИ, обязательно скажите об этом администратору.

Самая главная ценность исследования на этом аппарате заключается не в получении трогательной картинки и фотографии неродившегося малыша, как думают некоторые будущие папы и мамы.

Гораздо более важная вещь — максимальная точность информации о здоровье малыша. Уровень аппаратуры таков, что, работая в том и другом режимах — 3D и 2D — диагностики, позволяет выявить «незамеченные» другими аппаратами пороки развития.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} А это очень важно для здоровья будущего малыша, в некоторых случаях — это вопрос жизни.

Безопасно ли трехмерное УЗИ

В результате многочисленных исследований, проведенных зарубежными специалистами, признано, что ультразвуковое исследование является надежным и безопасным методом.

Трехмерное УЗИ отличается только тем, что расширяет возможности диагностики. Важно понимать, что дополняются только новые функции, а частота сканирования, интенсивность и мощность ультразвуковой волны остаются прежними, такими же, как и при обычном исследовании.

В нашей клинике используется отвечающий самым высоким требованиям безопасности аппарат марки Voluson от General Electric, США.

Ролик является собственностью Центра косметологии и пластической хирургии.
Нарушение авторских прав карается в соответствии с законом.

На каком сроке делается трехмерное УЗИ

Обычно, будущие мамы проходят ультразвуковое исследование 3 раза в определенные сроки, которые называются скрининговыми.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Врач должен определить, правильно ли развивается плод, исключая возможные пороки.

Мы рекомендуем проходить трехмерное УЗИ в интервале от 12 до 32 недель беременности, по возможности совместив его с плановым исследованием.

Примерно до 24 недель ребенка можно видеть на экране целиком, т. к. он еще не очень большой и охватывается датчиком полностью. Позже трехмерное УЗИ позволяет рассмотреть отдельные части тела малыша: головку, ручки, ножки, личико.

Многие мамы, сделавшие УЗИ после 26 недель, утверждают, что уже видят, на кого похож малыш.

Как проходит процедура трехмерного УЗИ

В клинике гинекологии Центра косметологии и пластической хирургии имени С.В. Нудельмана процедура трехмерного УЗИ для будущих мам занимает около часа. Полноценное обследование беременных проводят специалисты — акушеры-сонографисты. Исследование идет сначала в двухмерном режиме, затем подключается объемный датчик, и на экране появляется объемное изображение малыша. Важным моментом исследование является изучение маточно-плодово-плацентарного кровообращения (допплерометрия) с использованием режима цветового картирования.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} «Цветной допплер» повышает точность и скорость исследования за счет прямой визуализации сосудов. С максимальной точностью можно подтвердить или исключить наиболее часто встречающиеся во втором и третьем триместре беременности диагнозы: плацентарную недостаточность, обвитие пуповиной шеи плода.

Врач подробно комментирует и дает развернутое медицинское заключение, выдает стандартный общепринятый протокол развернутого ультразвукового исследования.

Можно ли записать результаты трехмерного УЗИ?

Все результаты исследования и цифровые фото записываются на USB-flash. Услуга включена в стоимость в стоимость обследования, как и стоимость самого USB-flash.

Можно ли папам присутствовать на трехмерном УЗИ

Кабинет УЗИ в клинике гинекологии Центра косметологии и пластической хирургии специально оборудован таким образом, чтобы будущие родители могли присутствовать на приеме вместе. Нет необходимости заглядывать через плечо доктора, пытаясь разглядеть на мониторе прибора своего наследника — специально для мам и пап удобно расположен большой экран, на котором хорошо видно все исследование, от начала до конца.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Трехмерное УЗИ - сложная процедура, которая требует полной концентрации внимания врача и максимальной расслабленности мамы. Лучше, если в сопровождающих беременную будет только один близкий человек (взрослый): комфортная обстановка для беременной принципиально важна для успеха исследования, а это ведь прежде всего - исследование, а не развлечение.

Во время исследования мы делаем видеозапись, которую вы сможете показать дома детям, друзьям и близким.

НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ УЗИ ДЛЯ БЕРЕМЕННЫХ

В клинике появился новый аппарат УЗИ-диагностики - Voluson E8.
Полностью цифровая ультразвуковая система Voluson E8 компании GE Healthcare занимает лидирующие позиции в области акушерства и гинекологии. Теперь в полной и самой последней комплектации аппарат Voluson E8 появился и в Екатеринбурге.
Функции аппарата специально предназначены и оптимизированы для исследования плода а также 4D исследований, Voluson E8 имеет максимальную производительность и новейший режим работы 4D HD Live.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}
Технология позволяет проводить детальное исследование плода на самых ранних стадиях беременности и выявить такие анатомические подробности плода, которые раньше были недоступны.

Новые возможности аппарата Voluson E8 в УЗИ-исследовании повышают надежность принимаемых клинических решений:

  • Благодаря сверхвысокому контрастному разрешению, которое уменьшает шумы и артефакты и помогает увидеть истинную структуру тканей, улучшена визуализация органов
  • Высокочувствительная двунаправленная допплерография для исследования кровотока обеспечивает четкую прорисовку сосудов
  • Технология объемной контрастной визуализации позволяет повысить качество объемных изображений в одной или во всех трех проекциях
  • Высокочастотный внутриполосный 4D-датчик с высоким разрешением позволяет визуализировать мельчайшие детали в первом триместре беременности, а также при гинекологических исследованиях, повышая надежность диагноза
  • Увеличенная зона ультразвукового изображения улучшает четкость и детализацию области визуализации, что позволяет получать больше информации об анатомических структурах на одном изображении

ИМЕЮТСЯ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ, НЕОБХОДИМА КОНСУЛЬТАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТА

Что такое 3D телевизор, и чем он отличается от обычного телевизора

В современном мире высоких технологий уже ни для кого не новость изображение 3D.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Многие ходили в кинотеатр, на киносеанс в 3D. И, несмотря на то, что эта технология появилась уже достаточно давно, мало кому она была доступна в домашних условиях. На сегодняшний день эта ситуация кардинально изменилась. 3D телевизоры уже весьма распространены, их можно найти в каждом магазине техники. В связи с этим многие задаются вопросом, что такое 3D телевизор?

0.1. 3D телевизор

Именно 3D телевизоры позволяют насладиться объемным изображением, не покидая своего дома. Благодаря тому, что в наше время нет ни одного стандарта 3D изображений, при этом перспективы каждой технологии, с точки зрения реализации, каждый изготовитель оценивает по своему, на рынке России уже сегодня можно найти самые разнообразные телевизоры с функцией 3D.

1. Что такое 3Д телевизор

Для ответа на вопрос, что такое 3D телевизор, необходимо понять, что такое 3D изображения и рассмотреть самую технологию.

3D означает трехмерный. Другими словами 3D изображение – это трехмерное, объемное изображение.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Все физические объекты в реальном мире имеют три измерения – это длина, высота и ширина. К тому же, если смотреть на реальный объект в реальном мире, человек способен оценить не только их высоту и ширину, но и глубину объекта, а также предполагаемое расстояние до объекта.

Такие возможности достигаются благодаря тому, что человек имеет два глаза, которые расположены на некотором отдалении друг от друга. Такое расположение органов зрения позволяет каждому глазу получать разное изображение, отличающиеся перспективы на объект. Если человек смотри двумя глазами, то мозг объединяет эти две картинки в одну. Однако если закрыть один глаз, то можно получить именно то изображение, которое воспринимает открытый глаз. Таким образом, можно увидеть различия перспектив объектов, которые находятся в непосредственной близости или на небольшом расстоянии от человека.

Благодаря работе мозга, две получаемые картинки от органов зрения превращаются в одну. В результате такой обработки двух разных изображений получается трехмерная картинка, которая позволяет оценить реальные размеры объекта, его глубину, а также расстояние.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Именно на этом свойстве человеческого визуального восприятия и построена технология трехмерного изображения. 3D телевизор выдает специальную картинку, которая обманывает наши глаза, заставляя видеть объемное изображение. Это достигается путем воспроизведения разных изображений для каждого глаза. Именно по этой причине, для просмотра 3D фильмов необходимы специальные 3D очки.

В наше время существует две технологии трехмерного изображения:

  • Затворная технология. Более известная как активная технология трехмерного изображения.
  • Поляризационная технология – пассивная технология 3D.

В зависимости от технологии различаются и сами телевизоры. Помимо этого, для просмотра полноценного трехмерного изображения требуются специальные очки, которые также должны соответствовать телевизору. То есть, для затворной технологии используются специальные затворные очки, причем такие очки, как правило, работают только с телевизорами той же марки. К примеру, с 3D телевизором марки LG, работающим по затворной технологии, могу использоваться только очки от компании LG.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

2. Чем отличается 3D телевизор от обычного?

Современные производители мониторов, игровых устройств, а также другой мультимедийной продукции активно разрабатывают и продвигают на мировые рынки новые технологии трехмерного изображения. При этом такая продукция пользуется огромным спросом у потребителей.

На данный момент 3Д телевизоры являются доступными для большинства, если не для каждого, пользователя. ИХ легко найти в любом магазине бытовой техники.

3Д телевизор являет собой специальное устройство, которое принимает сигналы ТВ, и выводят их на экран в виде трехмерной картинки и звуковых эффектов. Главное их отличие от простых телевизоров заключается именно в изображении, так как последние способны воспроизводить только 2D изображение. Чтобы понять разницу между этими форматами, необходимо разобрать, принцип действия 3D телевизоров.

3. 3D телевизоры

Как уже говорилось выше, существует две технологии трехмерного изображения. Так затворная технология – это телевизоры с активным 3D, а поляризационная технология предполагает телевизоры с пассивным 3D.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Это две совершенно разные технологии. Если покупается телевизор с затворной технологией, к нему в комплекте прилагаются специальные очки, оснащенные затворами. В определенные моменты эти затворы открываются и закрываются поочередно. То есть в момент, когда левый затвор закрыт, правый обязательно будет открытым. Конечно, происходит это настолько быстро, что человеческий глаз просто не способен это увидеть, благодаря чему и возникает эффект 3D. Для этого очки имеют специальный датчик, который настроен на телевизор. Такие очки могут работать только с соответствующей маркой телевизора.

4. 3D LED-телевизоры Samsung серии F8000: Видео

Телевизоры с активной технологией имеют высокую частоту обновления кадров. Минимальная частота при этом составляет 120 Гц. Это означает, что изображение на экране обновляется по 60 раз в секунду для каждого глаза, с такой же скоростью работают и затворы на очках.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Если вы выбрали пассивный 3D телевизор, то к нему в комплекте также идут специальные очки, но они могут работать с любой маркой устройств с поляризационной технологией 3D. В этом случае телевизор оснащен специальным поляризационным фильтром для каждой строки картинки на экране. Эти строки фильтруются через одну. Таким образом, надевая очки, один глаз видит четные строки, а другой – нечетные. Так появляется эффект пассивного 3D изображения.

3D-конфигуратор для футболки

Почему следует использовать 3D-конфигуратор для футболок

Прелесть покупок футболок в Интернете заключается в том, что их стандартный стиль позволяет покупателям сосредоточиться на поиске уникального дизайна, который им нравится. А еще лучше, они могут настроить свои собственные футболки, чтобы воплотить в жизнь именно ту рубашку, которую они задумали.

Тем не менее, покупатели хотят иметь представление о том, как их футболка будет выглядеть в реальной жизни, прежде чем совершить покупку.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Интерактивные 3D-модели повышают уверенность покупателей футболок

С помощью 3D-конфигуратора товаров от Threekit покупатели могут просматривать футболки в Интернете так же, как они просматривают стойку с футболками в магазине: они могут смотреть на любой стиль под любым углом.3D-модели позволяют покупателям виртуально взаимодействовать с различными дизайнами футболок, прежде чем они выберут свой любимый.

Интерактивный 360-градусный просмотрщик позволяет покупателю поворачивать футболку в любом направлении, что упрощает проверку дизайна на передней и задней части рубашки. Покупатели также могут использовать этот инструмент для увеличения мелких деталей, которые делают дизайн футболки уникальным.

Другие технологии электронной коммерции не могут конкурировать с привлекательностью 3D-моделей: исследование рынка 3D-изображений показало, что 82% посетителей страницы продукта активируют 3D-представление, а 95% респондентов предпочитают интерактивное 3D-представление воспроизведению видео.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Надежность трехмерной визуализации продукта повышает доверие покупателей. То же исследование рынка показало, что коэффициент конверсии увеличился почти на 40 процентов для продуктов в категориях, которые были оцифрованы в 3D.

3D-конфигуратор продуктов воплощает в жизнь индивидуальный дизайн футболок

Покупки футболок на заказ растут: ожидается, что к 2025 году рынок вырастет до 10 миллиардов долларов. Технология цифровой печати позволяет легко печатать любые изображения или графические файлы на одежде, что означает, что покупатели могут выбирать из бесконечного количества стилей, чтобы сделать свой собственный дизайн.Но сначала они захотят визуализировать конечный продукт того рисунка, который они хотят, например, на футболке.


Threekit - это программное обеспечение для визуализации продуктов, которое создает фотореалистичные изображения, интерактивные 3D и возможности дополненной реальности, которые помогают предприятиям продавать больше. Чтобы узнать больше, назначьте время с одним из наших товарищей по команде.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Этот 3D-принтер не скрывает деталей | MIT News

Форма, цвет и блеск.

Это три наиболее заметные визуальные особенности объекта.В настоящее время 3D-принтеры могут достаточно хорошо воспроизводить форму и цвет. Однако глянец остается проблемой. Это связано с тем, что оборудование для 3D-печати не предназначено для работы с лаками различной вязкости, которые придают поверхностям глянцевый или матовый вид.

Исследователь из Массачусетского технологического института Майкл Фоши и его коллеги могут найти решение. Они разработали комбинированную аппаратную и программную систему печати, в которой используются стандартные лаки для придания объектам реалистичных, пространственно изменяющихся блеска.Фоши называет это продвижением «главой в книге о том, как добиться точного воспроизведения внешнего вида с помощью 3D-принтера».

Он предполагает ряд приложений для этой технологии. Его можно использовать для точного воспроизведения изобразительного искусства, позволяя распространять почти безупречные реплики в музеи без доступа к оригиналам.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Это также может помочь создать более реалистичное протезирование. Фоши надеется, что это продвижение представляет собой шаг к визуально идеальной 3D-печати, «где вы почти не заметите разницу между объектом и воспроизведением».”

Фоши, инженер-механик из Лаборатории компьютерных наук и искусственного интеллекта Массачусетского технологического института (CSAIL), представит доклад на конференции SIGGRAPH Asia в следующем месяце вместе с ведущим автором Михалом Пиоварчи из Университета Лугано в Швейцарии. Соавторами являются Войцех Матусик из Массачусетского технологического института, Вахид Бабаи из Института Макса Планка, Шимон Русинкевич из Принстонского университета и Петр Дидик из Университета Лугано.

Глянец - это просто мера того, сколько света отражается от поверхности.Глянцевая поверхность является отражающей, как зеркало. Слабоглянцевая или матовая поверхность не имеет отражения, как бетон. Лаки, которые придают глянцевый вид, имеют тенденцию быть менее вязкими и при высыхании превращаются в гладкую поверхность.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Лаки, придающие матовость, более вязкие - ближе к меду, чем к воде. Они содержат крупные полимеры, которые при высыхании беспорядочно выступают из поверхности и поглощают свет. «У вас есть куча этих частиц, вылетающих из поверхности, что придает вам шероховатость», - говорит Фоши.

Но эти полимеры создают дилемму для 3D-принтеров, тонкие жидкостные каналы и сопла которых не предназначены для меда.«Они очень маленькие и легко забиваются», - говорит Фоши.

Современный способ воспроизвести поверхность с пространственно изменяющимся блеском является трудоемким: объект изначально печатается с высоким блеском и с поддерживающими структурами, покрывающими те места, где в конечном итоге желательно матовое покрытие. Затем материал основы удаляется для придания шероховатости окончательной поверхности. «Невозможно указать принтеру производить матовое покрытие в одной области или глянцевое покрытие в другом», - говорит Фоши.Итак, его команда разработала такой.

Они разработали принтер с большими соплами и возможностью нанесения капель лака различного размера.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Лак хранится в резервуаре под давлением принтера, а игольчатый клапан открывается и закрывается для выпуска капель лака на поверхность для печати. Различные размеры капель достигаются за счет контроля таких факторов, как давление в резервуаре и скорость движения игольчатого клапана. Чем больше лака высвобождается, тем крупнее осаждается капля. То же самое и со скоростью высвобождения капли.«Чем быстрее он движется, тем больше распространяется при столкновении с поверхностью», - говорит Фоши. «Таким образом, мы существенно меняем все эти параметры, чтобы получить желаемый размер капли».

Принтер обеспечивает пространственно изменяющийся блеск за счет передачи полутонов. В этой технике дискретные капли лака расположены в виде узоров, которые при взгляде на расстоянии кажутся сплошной поверхностью. «Наши глаза фактически сами смешивают», - говорит Фоши. В принтере используются всего три стандартных лака - один глянцевый, один матовый и один промежуточный.Путем включения этих лаков в заранее запрограммированный полутоновый рисунок принтер может обеспечивать непрерывные, пространственно изменяющиеся оттенки глянца по всей поверхности печати.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Наряду с оборудованием команда Фоши создала программный конвейер для управления выводом на принтер. Во-первых, пользователь указывает желаемый узор глянца на печатаемой поверхности. Затем принтер выполняет калибровку, пробуя различные узоры полутонового изображения трех поставляемых лаков. Основываясь на отражательной способности этих калибровочных шаблонов, принтер определяет правильный шаблон полутонового изображения для использования в окончательном задании печати для достижения наилучшего возможного воспроизведения.Исследователи продемонстрировали свои результаты на различных объектах «2.5D» - в основном на плоских распечатках с текстурой, которая различалась на полсантиметра в высоту. «Они были впечатляющими», - говорит Фоши. «Они определенно лучше чувствуют то, что вы на самом деле пытаетесь воспроизвести».

Команда планирует продолжить разработку оборудования для использования на полностью трехмерных объектах. Дидик говорит, что «система спроектирована таким образом, что в будущем возможна интеграция с коммерческими 3D-принтерами».3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Работа поддержана Национальным научным фондом и Европейским исследовательским советом.

Ускоренное картирование всего сердца в режиме свободного дыхания Т 2 с высоким изотропным разрешением

Цель: Для обеспечения возможности свободного дыхания всего сердца 3D T 2 картирование с высоким изотропным разрешением в клинически осуществимое и предсказуемое время сканирования. Этот трехмерный скорректированный по движению сигнал с неполной дискретизацией, согласованный (ОБЯЗАТЕЛЬНО) T 2 , достигается путем комбинирования декартова сбора данных, подготовленного по T 2 с компенсацией неполной дискретизации, с реконструкцией на основе патчей высокого порядка.

Методы: Получение отображения 3D MUST-T 2 состоит из запускаемой электрокардиограммой, подготовленной T 2 сбалансированной последовательности SSFP с неселективными импульсами насыщения.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Получены три недо выборочных объема T 2 с взвешенным значением T 2 с использованием трехмерной декартовой выборки переменной плотности с увеличением времени подготовки T 2 . Навигатор на основе 2D-изображений используется для коррекции дыхательного движения сердца и обеспечивает 100% эффективность сканирования.Мультиконтрастная реконструкция на основе фрагментов с недостаточной дискретизацией и высокой размерностью используется совместно со словарным сопоставлением для создания карт 3D T 2 . Предложенная структура была оценена в симуляциях, фантомных экспериментах и ​​in vivo (10 здоровых субъектов, 2 пациента) с изотропным разрешением 1,5 мм 3 . Трехмерный MUST-T 2 сравнивался со стандартной последовательностью спин-эхо с множеством эхо (фантом) и традиционным одноразовым 2D-картированием SSFP T 2 с задержкой дыхания (in vivo).

Полученные результаты: Трехмерный MUST-T 2 показал высокую точность в фантомных экспериментах (R 2 > 0,99).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Точность значений T 2 была аналогичной для 3D MUST-T 2 и 2D сбалансированного SSFP T 2 картирования in vivo (5 ± 1 мс против 4 ± 2 мс, P = 0,52). Несколько более длинные значения T 2 наблюдались с 3D MUST-T 2 по сравнению с 2D сбалансированным картированием SSFP T 2 (50.7 ± 2 мс против 48,2 ± 1 мс, P <0,05). Предварительные результаты у пациентов продемонстрировали значения T 2 в соответствии с литературными значениями.

Вывод: Предлагаемый подход позволяет осуществлять трехмерное картирование всего сердца T 2 при свободном дыхании с высоким изотропным разрешением примерно за 8 минут, обеспечивая точное и точное количественное определение ткани миокарда T 2 за клинически приемлемое время сканирования.

Ключевые слова: Количественное определение Т2; быстрое отображение; изотропное разрешение; коррекция движения; картирование миокарда Т2.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Границы | Характеристика роли моноцитов в иммунотерапии Т-клеточного рака с использованием трехмерной микрофлюидной модели

Введение

Адоптивная клеточная терапия (АКТ) состоит из введения лимфоцитов онкологическим больным для обеспечения противоопухолевого эффекторного ответа.В настоящее время способность генетической инженерии лимфоцитов экспрессировать Т-клеточные рецепторы или химерные антигенные рецепторы еще больше продвинула АКТ для лечения рака (1–6). Т-клетки, сконструированные для экспрессии TCR, специфичных для вирусных антигенов, могут представлять собой релевантный терапевтический инструмент против опухолевых клеток, экспрессирующих вирусные антигены. Qasim et al. продемонстрировали клинический потенциал Т-лимфоцитов, специфичных к вирусу гепатита В (HBV), перенаправленных Т-клеточным рецептором (Т-лимфоциты TCR) для сострадательного лечения пациента с метастатическим заболеванием гепатоцеллюлярной карциномы, связанной с HBV (HBV-HCC)Адаптивный перенос HBV-специфических TCR T-клеток привел к 90% снижению циркулирующего HBsAg после 4 недель лечения без побочных эффектов (4).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Роббинс и др. также продемонстрировали эффективность TCR T-клеток в лечении меланомы и синовиальной саркомы (7). Предыдущие исследования, однако, показали, что различные протоколы клеточной инженерии приводят к появлению TCR T-клеток, которые могут значительно различаться как по противоопухолевой эффективности, так и по их взаимодействию с микроокружением опухоли (TME) (8-10).В частности, исследования показали, что Т-клетки TCR, специфичные для HBV, фенотипически различаются, если продуцируются либо ретровирусной трансдукцией, либо электропорацией мРНК, причем каждый тип TCR-клеток также имеет определенные преимущества для терапии (11–14).

При раке факторы, связанные с TME, которые, как известно, ингибируют функции эффекторных Т-клеток, включают иммуносупрессивные стромальные клетки и экспрессию лиганда запрограммированной смерти-1 / запрограммированной смерти-1 (PD-L1 / PD-1) как на раковых клетках, так и на миелоидных клетках. -производные клетки (15, 16).Более плохой прогноз заболевания наблюдался у пациентов с более высоким уровнем экспрессии PD-L1 или более высокой долей PD-1 + CD8 + Т-клеток в TME (17–21).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} PD-L1 был описан как «молекулярный щит», который защищает опухолевые клетки от эрадикации, опосредованной Т-клетками (22). Кроме того, было показано, что вмешательство в ось PD-L1 / PD-1 увеличивает цитотоксическую активность CD8 + Т-клеток (19, 20, 22, 23). Фактически, недавно стратегии, использующие антитела, нацеленные на ось PD-L1 / PD-1, были одобрены для использования у пациентов после обнадеживающих клинических испытаний (24–27).Однако такие данные основаны на физиологических инфильтрирующих опухоль лейкоцитах (TIL), в то время как вклад передачи сигналов на основе PD-L1 на функции TCR T-клеток еще предстоит изучить.

Моноциты / макрофаги составляют основной компонент стромы опухоли и, как известно, в значительной степени модулируют активность эффекторных Т-клеток через PD-L1 (19, 28, 29). Примечательно, что в ответ на TME-специфические сигналы моноциты могут приобретать уникальные фенотипы и функции, становясь ассоциированными с опухолью макрофагами (30–32).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Исследования сходятся во мнении, что моноциты способны только к слабому и непродолжительному противоопухолевому ответу и, вместо этого, преимущественно проявляют протопухолевую и иммуносупрессивную функции (33–35). Однако присущая моноцитам пластичность предполагает, что эти клетки могут вызывать гетерогенный ответ.

Мышиные модели широко используются в исследованиях для изучения взаимодействий между TIL и TME (36–39). Хотя такие модели представляют собой полезный инструмент для выяснения механизмов, лежащих в основе патологии рака и уклонения от иммунитета, с высокой физиологической точки зрения, их невозможно использовать в клинических условиях для быстрой оценки эффективности терапевтических Т-клеток.Это связано с тем, что мышиные модели дороги, сложны в обращении, требуют нескольких месяцев для разработки и могут не полностью отражать сложность человеческой системы. В частности, в области HBV-HCC в настоящее время не существует надежной и физиологически релевантной мышиной модели (39, 40).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

В качестве альтернативы существуют двухмерные или трехмерные модели опухолей in vitro . В недавнем обзоре (41) подробно представлены многочисленные трехмерные модели опухолей, включая сфероиды или органоиды, микрожидкостные культуральные системы, а также многослойные культуры на основе фильтров или бумаги (например,г., Трансвелл) (41). Микрожидкостные платформы имитируют важные физиологические сигналы благодаря архитектурной поддержке трехмерного внеклеточного матриксоподобного гидрогеля. Такие платформы также имеют явные преимущества по сравнению с обычными 3D-культурами в лунках или конфигурации Transwell, такие как (i) сокращение количества реагентов и биологических компонентов при относительной экономии затрат, (ii) лучшая доступность для получения изображений в реальном времени с помощью стандартных микроскопов, (iii) возможность для создания химических градиентов и (iv) повышенной клеточной и архитектурной сложности, такой как совместное культивирование опухолевых клеток с эндотелиальными, стромальными и иммунными клетками (42–49).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Для нашей цели изучения клеточного взаимодействия также важно устранить in vitro артефактов, таких как гравитационные взаимодействия между клетками, которые происходят в обычных трехмерных чашках Петри или анализах миграции Transwell. Таким образом, с учетом общих ограничений, связанных с использованием экспериментальных моделей, трехмерная микрофлюидная модель TME не только устраняет разрыв между классическими системами in vitro и текущими моделями in vivo , но также может служить быстрым и эффективным инструментом в доклиническая оценка TCR T-клеток для персонализированного лечения.

В этом исследовании разработана трехмерная микрофлюидная платформа для воспроизведения среды HBV-HCC для изучения влияния первичных моноцитов человека на эффективность уничтожения HBV-специфических TCR T-клеток (рис. 1A). В частности, в этом исследовании изучается влияние моноцитов на эффективность уничтожения HBV-специфических TCR T-клеток, которые продуцируются различными методами, и исследуется вклад экспрессии PD-L1 / PD-1 во взаимодействие между этими клетками.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Мы показываем, что наша трехмерная микрофлюидная модель обеспечивает улучшенные физиологические преимущества по сравнению со стандартными двумерными системами для исследования поведения опухолевых иммунных клеток и чрезвычайно полезна для выяснения влияния определенных биологических путей на взаимодействия моноцитов и TCR Т-клеток.

Рисунок 1 . (A) Трехмерная микрофлюидная модель микроокружения многоклеточной опухоли, состоящая из среднего гидрогелевого канала (2), фланкированного двумя медиаканалами (1, 3), для механистического исследования влияния моноцитов на Т-лимфоциты, перенаправленные на рецептор Т-клеток (TCR Т-клетки) уничтожение агрегатов опухолевых клеток. Моноциты человека были вставлены вместе с агрегатами клеток-мишеней HepG2-preS1-GFP в коллагеновый гель в центральной области гидрогеля (2), в то время как Т-клетки TCR, специфичные для вируса гепатита B (HBV), были добавлены в один жидкостный канал (1) для имитации внутрипеченочная карцинома среда.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} (B) Репрезентативное конфокальное изображение агрегата клеток-мишеней (зеленым), окруженного моноцитами (синим) и HBV-специфическими TCR T-клетками (белым), на котором присутствие мертвых клеток-мишеней составляет DRAQ7 + ( в красном). Гибель клеток-мишеней определяется количественно, как показано, на основе объемной части DRAQ7 + в общем объеме каждого агрегата, меченного GFP.

Материалы и методы

Культура клеток

Линия клеток HCC человека, HepG2, была трансдуцирована конструкцией, содержащей часть preS1 гена белка оболочки HBV генотипа D, ковалентно связанного с GFP (HepG2-preS1-GFP), с использованием упаковочной системы Lenti-X ™ HTX (Clontech, ST0282 ) в соответствии с инструкциями производителя.Клетки HepG2-preS1-GFP культивировали в культуральной среде R10: RPMI 1640 (ThermoFisher Scientific, 21870076) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS; ThermoFisher Scientific 10082147), 20 мМ Hepes (ThermoFisher Scientific, 15630080), 1 мМ пируват натрия (ThermoFisher Scientific, 11360070), 100 МЕ / мл пенициллина (ThermoFisher Scientific, 15070063), 100 мкг / мл стрептомицина (Sigma-Aldrich, S9137), аминокислоты MeM (ThermoFisher Scientific, 11130051), Glutamax (35050061 ), Заменимые аминокислоты MeM (ThermoFisher Scientific, 11140050), 5 мкг / мл плазмоцина (InvivoGen, ant-mpt) и 5 ​​мкг / мл пуромицина (Takara, 631305) для отбора клеток-мишеней, экспрессирующих трансген (11) .3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} HepG2-preS1-GFP использовали в экспериментах на 9–11 пассаже. Клеточная линия HepG2.2.15 поддерживает полную репликацию HBV и культивировалась в культуральной среде D10: DMEM (ThermoFisher Scientific, MA11960044) с добавлением 10% инактивированного нагреванием FBS, 1 мМ пирувата натрия, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина, Незаменимые аминокислоты MeM, 200 мкг / мл реагента Geneticin (ThermoFisher Scientific, 10131035) для отбора клеток-мишеней, экспрессирующих трансген. Обе линии клеток поддерживали в увлажненном инкубаторе с CO 2 при 37 ° C и 5% CO 2 (11, 38).

Мононуклеарные клетки периферической крови человека (PBMC) были выделены из цельной крови здоровых доноров с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Paque (GE Healthcare, 17-1440-02) после информированного согласия доноров в соответствии с Хельсинкской декларацией. Полные моноциты, либо аутологичные, либо аллогенные, выделяли из PBMC с использованием набора для выделения пан-моноцитов (Miltenyi Biotec, 130-096-537).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} В результате были получены чистые (92 ± 0,5%) и жизнеспособные (98,4 ± 1%) моноциты. В качестве альтернативы, человеческие PBMC использовали для получения HBV-специфических TCR T-клеток или увеличения объема трансдуцированных T-клеток, как описано в разделе «Выделение, трансдукция и экспансия TCR-перенаправленных T-клеток.«Все образцы крови и процедуры, использованные в этом исследовании, были одобрены Наблюдательным советом Национального университета Сингапура. Все эксперименты проводились в соответствии с утвержденными инструкциями и правилами.

Выделение, трансдукция и увеличение TCR-перенаправленных Т-клеток

Ретровирусно трансдуцированных Т-клеток продуцировали и размножали, как описано ранее (11). Вкратце, после выделения PBMC стимулировали 600 МЕ / мл рекомбинантного человеческого интерлейкина-2 (rhIL-2; Miltenyi Biotec, 130-097-745) и 50 нг / мл анти-CD3 (eBioscience, 16-0037-81. ) в AIM-V (ThermoFisher Scientific, 12055091), 2% (об. / об.) сыворотки AB человека (Sigma-Aldrich, H6914) в течение 48 часов перед трансдукцией вектором MP-71, содержащим цепи Vα34 и Vβ3 HBs183.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} -91-специфичные (Ts) или HBcore18-27-специфические (Tc) последовательности TCR.Массово трансдуцированные Т-клетки размножались и рестимулировались с использованием 0,5–1 × 10 6 TCR-трансдуцированных Т-клеток, 2 × 10 5 облученных (2500 рад) T2-клеток, подвергнутых импульсному воздействию 1 мкг / мл любого из пептидов HBs183-91 (FLLTRILTI ) или HBcore18-27 (FLPSDFFPSV) (Genscript, синтезированные на заказ пептиды) и 1,8 × 10 6 облученных PBMC в качестве питателей. Клетки культивировали в течение примерно 2 недель в AIM-V, 2% сыворотке крови человека с AB с добавлением 100 МЕ / мл rhIL-2, 10 нг / мл rhIL-7 (Miltenyi Biotec, 130-095-362) и 10 нг. / мл rhIL-15 (Miltenyi Biotec, 130-095-764).В некоторых экспериментах Т-клетки CD8 + были обогащены посредством отрицательной селекции трансдуцированных Т-клеток с использованием микрогранул CD4 (Miltenyi Biotec, 130-045-101) в соответствии с инструкциями производителя.

Производство мРНК s183-191 TCR и электропорация

МРНК рецептора Т-клеток

получали, клонировали, размножали и концентрировали, как описано ранее (12).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 5–10 × 10 6 PBMC были активированы в течение 8 дней с помощью 600 МЕ / мл rhIL-2 и 50 нг / мл анти-CD3 в AIM-V, 2% сыворотки AB человека и rhIL-2 был увеличен до 1000 МЕ / мл за 1 день до электропорации.Во время электропорации 10 × 10 6 клеток суспендировали в 200 мкл среды T4 с низкой проводимостью BTXPRESS (Harvard Bioscience Inc., 47-0003) и добавляли мРНК TCR в концентрации 100 мкг / мл. Смесь помещали в сертифицированную кювету и подвергали электропорации с использованием специализированной программы системы электропорации AgilePulse Waveform (Harvard Bioscience Inc., 47-0201N). После электропорации клетки ресуспендировали в AIM-V, 20% сыворотке AB человека с добавлением 100 МЕ / мл rhIL-2 и культивировали при 37 ° C и 5% CO 2 в течение 24 часов до анализа.Т-клетки, экспрессирующие TCR, распознающий пептид HBcore18-27, были дополнительно подготовлены для использования в качестве контроля, как описано ранее (12).

Проточная цитометрия

Антитела для окрашивания клеточной поверхности были получены от BD Biosciences (античеловеческие CD8 PE-CF594 562282, CD8 PE-Cy7 557746), Biolegend (античеловеческие PD-L1 BV711 329722, PD-1 BV421 329920) и eBioscience (античеловеческие -человеческий CD14 eFluor450 48-0149, PD-1 APC 17-2799).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} HBV-специфические TCR T-клетки анализировали на экспрессию TCR с использованием специфических пентамерных комплексов HLA-0201 Env183-91 (FLLTRILTI) (Proimmune, 027) или декстрамерных комплексов HLA-0201 core18-27 (FLPSDFFPSV) (Immudex, WB3289).

Перед анализом проточной цитометрии клетки-мишени HepG2-preS1-GFP, моноциты и HBV-специфические TCR Т-клетки культивировали совместно в 2D-лунках в течение 24 часов в AIM-V, 2% сыворотке крови человека с добавлением 100 МЕ / мл rhIL-2. Для окрашивания на PD-L1 или PD-1 клетки собирали без использования трипсина. После сбора супернатанта клетки инкубировали с PBS / EDTA (PBS; 2 мМ EDTA; Axil Scientific, BUF-1052) (7-10 мин, 37 ° C, 5% CO 2 ) перед промыванием буфером MACS ( PBS, 0,5% BSA, 2 мМ EDTA).Клетки окрашивали живым / мертвым красителем (Life Technologies, L34957), разведенным в PBS 1: 500 (15 мин, комнатная температура), и дважды промывали в PBS перед окрашиванием на поверхностные маркеры. Окрашивание поверхности выполняли в буфере FACS [PBS, 2 мМ EDTA, 5% FBS, 5% сыворотки крови человека, 0,1% азида натрия (Merck, 1.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 06688.0100)] (20 мин, 4 ° C), используя либо рекомендованный производителем, либо предварительно титрованные разведения антител. Затем клетки дважды промывали холодным буфером FACS. Проточную цитометрию выполняли с использованием LSRII (BD Biosciences), а данные анализировали с помощью программы FACS Diva (BD Biosciences).

Совместное культивирование 2D и анализ импеданса

клеток-мишеней HepG2-preS1-GFP, моноцитов и HBV-специфических TCR T-клеток совместно культивировали в течение 24 часов в AIM-V, 2% сыворотке крови человека с AB с добавлением 100 МЕ / мл rhIL-2. Через 24 часа клетки собирали и окрашивали на экспрессию различных маркеров. Для количественной оценки HBV-специфического уничтожения TCR T-клеток с помощью измерений импеданса вместо HepG2-preS1-GFP в среде для культивирования клеток без добавления rhIL-2 использовали клетки HepG2.2.15 из клеточной линии гепатомы, поддерживающей полный цикл репликации HBV.Клетки HepG2.2.15 выращивали с моноцитами или без них в течение 24 часов перед добавлением в культуру неспецифических Т-клеток (Tns), Tdx или EP HBV-специфических TCR T-клеток.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Измерения импеданса проводили в режиме реального времени в течение не менее 24 часов совместного культивирования с соответствующими Т-клетками с использованием xCELLigence RTCA DP (ACEA Biosciences, 00380601050). Совместное культивирование в 2D и 3D проводили параллельно. Цитотоксическая активность Tdx или EP HBV-специфических TCR T-клеток была получена из дифференциальной площади под кривыми (AUC) HBV-специфических TCR T-клеток по отношению к Tns после получения нормализованного клеточного индекса (NCI).NCI рассчитывается путем принятия целевого индекса роста за 24-часовой период совместного культивирования и нормализации его ко времени, когда Т-клетки были впервые добавлены в культуру. Присутствие Tns учитывает неспецифическое убийство на исходном уровне.

Образование агрегатов опухолевых клеток

клеток HepG2-preS1-GFP использовали для формирования клеточных агрегатов в соответствии с ранее описанным протоколом (50). Вкратце, 1 × 10 6 клеток HepG2-preS1-GFP добавляли по каплям в 60-миллиметровую чашку Петри из полистирола (Dow Corning, 430589), которая была предварительно подвергнута лазерной абляции (VLS2.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 30 Desktop Laser, Universal Laser Systems) с матрицей 100 × 100 микролунок, расположенных на расстоянии 0,5 мм на 0,5 мм друг от друга (ширина 150 мкм, глубина 150 мкм). Перед добавлением клеток HepG2-preS1-GFP микролунки очищали 70% этанолом для удаления пузырьков и свободных полимеров, которые находились в чашках, стерилизовали УФ-лазером и затем обрабатывали 0,2% раствором плюроника (Pluronic F108; Sigma-Aldrich, 542342) в PBS в течение 1 ч для предотвращения прикрепления клеток к субстрату. Клетки HepG2-preS1-GFP культивировали в 5 мл R10 при 37 ° C и 5% CO 2 .Через 3 дня клеточные агрегаты извлекали из микролунки и просеивали через два клеточных фильтра с получением агрегатов диаметром 40–100 мкм (51, 52).

Изготовление микрофлюидного устройства

Устройства

на основе полидиметилсилоксана (PDMS) (набор силиконовых эластомеров Sylgard 184, Dow Corning) были изготовлены с использованием стандартных методов мягкой литографии, аналогичных ранее описанным (53).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Вкратце, силиконовый эластомер и отвердитель смешивали в соотношении 10: 1, дегазировали в эксикаторе, выливали в 90-миллиметровую чашку Петри, содержащую силиконовую форму для вафель (14), и отверждали в течение ночи при 37 ° C.Перед стерилизацией в автоклаве устройства были вырезаны из реплики PDMS, а входные / выходные порты были пробиты. После сушки при 80 ° C в течение ночи слои PDMS связывали в плазме (Covance Plasma System, Femto Science Inc.) с покровными стеклами размером 24 мм × 50 мм (VWR, VWRI631-1574) и обрабатывали 1 мг / мл поли- d-лизин (Sigma-Aldrich, P7886) для усиления связывания клеток и коллагенового матрикса со стенками микроканалов и оставленный при 80 ° C в течение не менее 24 часов для восстановления гидрофобности. Последнее устройство состоит из среднего гелевого канала, окруженного двумя медиаканалами.Гелевый канал имеет ширину 1 мм, а два жидкостных канала имеют ширину 500 мкм. Три канала соединены между собой, их длина составляет 14 мм, а высота - 120 мкм (рис.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 1A).

Трехмерные микрофлюидные эксперименты по совместному культивированию и блокированию

моноцитов вводили вместе с агрегатами клеток HepG2-preS1-GFP в растворе коллагенового геля крысиного хвоста (354236, Corning) 2,5 мг / мл типа I в центральную область гидрогеля микрофлюидного устройства (рис. 1A) (54). В каждое устройство высевали примерно 5–10 агрегатов клеток вместе с моноцитами в концентрации 4 × 10 6 клеток / мл.После инъекции гидрогеля в средний канал устройства выдерживали во влажном боксе при 37 ° C в течение 40 минут, чтобы обеспечить полимеризацию геля путем термического сшивания. Затем в оба боковых жидкостных канала добавляли среду R10, и устройствам давали возможность стабилизироваться в течение ночи при 37 ° C и 5% CO 2 . После этого Т-клетки, суспендированные в AIM-V с добавлением 2% сыворотки человеческого АВ и 100 МЕ / мл rhIL-2, добавляли в один жидкостный канал, создавая градиент давления, который позволял Т-клеткам TCR, специфичным к HBV, достигать поверхности раздела между гидрогель, содержащий клетки-мишени (рис.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 1А).Все эксперименты проводились в статических (без проточных) условиях культивирования, и среду для культивирования клеток заменяли каждый день.

Сначала были рассмотрены следующие экспериментальные конфигурации: (i) только HepG2-preS1-GFP ( Hep ), (ii) HepG2-preS1-GFP и моноциты ( Hep Mo ), (iii) HepG2-preS1-GFP и Ts ( Hep Ts ), (iv) HepG2-preS1-GFP и Tc ( Hep Tc ), (v) HepG2-preS1-GFP, Ts и моноциты ( Hep Ts Mo ) и (vi) HepG2-preS1-GFP, Tc и моноциты ( Hep Tc Mo ).Смерть HepG2-preS1-GFP затем была определена количественно, как описано в разделе «Окрашивание клеток, конфокальная визуализация и анализ трехмерных данных» для экспериментов с различными донорами.

Для экспериментов по блокированию был проведен тот же 3D-анализ, но среда для культивирования клеток была дополнена 10 мкг / мл блокатора анти-PD-L1 (Biolegend, 329701) или блокирования анти-PD-1 (eBioscience, 16-9989). -82) антитела или их соответствующие контроли изотипа: мышиный IgG2b, контроль изотипа κ (Biolegend, 400324) и мышиный IgG1, κ (eBioscience, 16-4714-82).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Окрашивание клеток, конфокальная визуализация и анализ трехмерных данных

Для обнаружения и визуализации гибели раковых клеток в реальном времени в культуральную среду добавляли ядерный краситель DRAQ7 (Biolegend, 424001). HBV-специфические TCR T-клетки были помечены Cell Tracker Violet BMQC (Life Technologies, C10094), как описано ранее (14). Три типа клеток в компартменте коллагена были визуализированы с помощью конфокальной микроскопии с использованием 20-кратного увеличения (LSM 780, Carl Zeiss), получая z-стеки трехмерных изображений опухолевого агрегата до того, как HBV-специфические TCR Т-клетки были введены в устройство ( 0 ч), а затем через 24 ч после добавления HBV-специфических TCR T-клеток.

Все конфокальные изображения были проанализированы с помощью программного обеспечения Imaris 8.1 (Bitplane). Гибель клеток-мишеней количественно определялась долей мертвых ядер в GFP-меченном опухолевом агрегате, как описано ранее (рис. 1B) (14). Для каждого состояния анализ гибели HepG2-preS1-GFP выполняли по меньшей мере для трех устройств и наносили на график как средний процент мертвого целевого объема экспериментов для моноцитов трех доноров.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Те же данные также представлены в виде «индекса мертвой цели», где процент мертвого целевого объема нормирован на процент TCR + Т-клеток.

Статистический анализ

Все данные были рассчитаны с учетом как минимум трех областей интереса (от трех до пяти совокупностей целевых ячеек) для каждого устройства. Если не указано иное, данные были нанесены либо в виде среднего значения ± SEM, либо в виде прямоугольных диаграмм, которые показывают 25-й, 50-й и 75-й процентили, а также минимальные и максимальные значения с использованием Prism (программное обеспечение GraphPad). Статистический анализ проводился с использованием двустороннего критерия Стьюдента t и, при необходимости, одностороннего дисперсионного анализа с помощью теста множественных сравнений Холма-Сидака.Только значения P и скорректированные значения P (ANOVA) менее 0,05 были приняты в качестве доказательства статистически значимого различия.

Результаты

Экспрессия PD-L1 / PD-1 на моноцитах, HepG2-preS1-GFP и Т-клетках TCR

Ось PD-L1 / PD-1 является важной иммунной контрольной точкой при HBV-HCC (18–20, 55–57).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Чтобы определить, играет ли эта ось роль в нашей модели, мы сначала совместно культивировали T-клетки Tdx и EP TCR, HepG2-preS1-GFP и моноциты в 2D-лунках в течение 24 часов, как описано в разделе «Материалы и методы», и измерили поверхностная экспрессия PD-L1 и PD-1 на различных типах клеток с помощью проточной цитометрии.

Исходно и Tdx, и EP CD8 + HBV-специфические TCR T-клетки (Ts) экспрессировали незначительные уровни PD-1 (рис. 2). Однако при совместном культивировании только с клетками-мишенями HepG2-preS1-GFP ( Hep Ts ) в течение 24 часов 36,6 ± 3,4% клеток Tdx Ts (рисунки 2A, B) и 44,6 ± 3,4% клеток EP Ts (рисунки 2C, D) наблюдали повышенную регуляцию экспрессии PD-1. Интересно отметить, что соотношение PD-1 + Tdx и EP Ts существенно не изменилось, когда моноциты также находились в совместной культуре ( Hep Ts Mo ), что позволяет предположить, что активация PD-1 не зависит от присутствия моноцитов.Ни Tdx, ни EP не контролируют HBV-специфические TCR T-клетки (Tc), не демонстрируют аналогичную повышающую регуляцию PD-1 при совместном культивировании только с клетками-мишенями ( Hep Tc ) или клетками-мишенями и моноцитами ( Hep Tc Mo ) .3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Таким образом, эти данные показывают, что повышающая регуляция PD-1 на Tdx и EP Ts-клетках обусловлена ​​активацией TCR T-клеток посредством специфического взаимодействия TCR с клетками-мишенями HepG2-preS1-GFP. Что еще более важно, данные предполагают, что оба типа TCR T-клеток могут проявлять сходную чувствительность к ингибированию на основе PD-L1 / PD-1, поскольку наблюдались сопоставимые пропорции PD-1 + HBV-специфических TCR T-клеток.

Рисунок 2 . (A, C) Показаны типичные гистограммы данных проточной цитометрии CD8 + PD-1 + Tdx (A) и EP (C) HBV-специфических TCR T-клеток через 24 часа. Окрашенные и неокрашенные гистограммы, соответственно, представляют окрашенный образец или подобранный изотипический контроль, где горизонтальная линия проведена на основе изотипического контроля для разграничения клеток PD-1 + . Указаны процентные значения клеток CD8 + PD-1 + .3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} (B, D) Столбчатые диаграммы показывают среднее значение ± SEM CD8 + PD-1 + TCR T-клеток трех доноров для Tdx (B) или EP (D) HBV-specific TCR T клетки; столбцы показаны там, где было проведено сравнение с * P ≤ 0,05, ** P ≤ 0,01 и **** P ≤ 0,0001. Статистическая значимость оценивалась односторонним дисперсионным анализом с тестом множественных сравнений Холма-Сидака. EP, мРНК-электропорированная; ВГВ, вирус гепатита В; Hep, HepG2-preS1-GFP; Мо, моноцит; Tc, контрольная Т-клетка; TCR T-клетки, T-клетки, перенаправленные на рецептор T-клеток; Tdx, преобразованный; Ts, HBV-специфические Т-клетки.

В соответствии с увеличением доли PD-1 + Т-клеток, почти все моноциты усиливали экспрессию PD-L1 при совместном культивировании с клетками-мишенями и Ts ( Hep Ts Mo) для любого Tdx (Рисунки 3A, B ) или EP (Рисунки 3C, D) Ts (91,6 ± 7,3% и 99,3 ± 0,3% соответственно).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Однако значительно более низкая доля моноцитов PD-L1 + наблюдалась при совместном культивировании с клетками-мишенями и Tc ( Hep Tc Mo) для Tdx или EP Tc (27.1 ± 9,9% и 26,2 ± 8,1% соответственно). Наконец, моноциты, культивируемые отдельно ( Mo ) или только с клетками-мишенями ( Hep Mo ), не проявляли никакой позитивной регуляции PD-L1. Таким образом, эти результаты предполагают, что, как и активация PD-1, увеличение доли моноцитов PD-L1 + связано с их взаимодействием с активированными Ts, которые контактировали с клетками-мишенями. Кроме того, не было значительного изменения экспрессии PD-L1 на клетках HepG2-preS1-GFP в присутствии Tdx или EP Ts с моноцитами или без них (рисунок S1 в дополнительном материале), что позволяет предположить, что моноциты в первую очередь опосредуют PD-L1- на основе эффектов.

Рисунок 3 . (A, C) Типичные гистограммы данных проточной цитометрии моноцитов CD14 + PD-L1 + для совместных культур с Tdx (A) или EP (C) HBV-специфический TCR T показаны клетки через 24 часа.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Окрашенные и не окрашенные гистограммы, соответственно, представляют окрашенный образец или подобранный изотипический контроль, где горизонтальная линия проведена на основе изотипического контроля для разграничения клеток PD-L1 + .Указаны процентные значения клеток CD14 + PD-L1 + . (B, D) Столбчатые диаграммы показывают среднее значение ± SEM моноцитов PD-L1 + для совместных культур с участием Tdx (B) или EP (D) HBV-специфических TCR T-клеток; Отрисовываются столбики, где было проведено сравнение с * P ≤ 0,05, *** P ≤ 0,001 и **** P ≤ 0,0001. Статистическая значимость оценивалась односторонним дисперсионным анализом с тестом множественных сравнений Холма-Сидака.EP, мРНК-электропорированная; ВГВ, вирус гепатита В; Hep, HepG2-preS1-GFP; Мо, моноцит; Tc, контрольная Т-клетка; TCR T-клетки, T-клетки, перенаправленные на рецептор T-клеток; Tdx, преобразованный; Ts, HBV-специфические Т-клетки.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Отсутствие разницы в активности Т-клеток Tdx и EP TCR при совместном культивировании с моноцитами в 2D анализах цитотоксичности

2D-анализы цитотоксичности для оценки влияния моноцитов на HBV-специфические TCR T-клетки были выполнены с использованием метода уничтожения импеданса, как описано в разделе «Материалы и методы» (рисунок S2 в дополнительных материалах).Перед культивированием T-клетки Tdx или EP TCR анализировали как на долю клеток CD8 + , так и на экспрессию TCR, используя специфические пентамерные комплексы для Ts или декстрамерные комплексы для Tc с помощью проточной цитометрии. При гейтировании по общим лимфоцитам Tdx Ts составлял 84 ± 10% CD8 + и 39 ± 17% TCR + , тогда как Tc составлял 74 ± 5% CD8 + и 37 ± 22% TCR + . Что касается EP T-клеток, Ts составляла 78 ± 5% CD8 + и 72 ± 5% TCR + , тогда как Tc составляла 75 ± 7% CD8 + и 58 ± 10% TCR + (рис.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} S3 в Дополнительный материал).Показанные результаты двумерных анализов цитотоксичности представляют собой процентное снижение дифференциальных AUC для образцов ( Hep Ts или Hep Ts Mo ) по сравнению с соответствующими контролями ( Hep Tns или Hep Tns Mo ) по сравнению с 24 ч совместного культивирования (Фигуры 4A, B). Когда присутствовали клетки Tdx Ts, не было статистически значимой разницы в снижении AUC в отсутствие ( Hep Ts ) или в присутствии ( Hep Ts Mo ) моноцитов (45 ± 5,1% и 39.7 ± 15,5% соответственно) (Рисунок 4C; левая панель). Точно так же не наблюдали разницы, когда клетки EP Ts добавляли к обеим культурам Hep Ts и Hep Ts Mo (33,8 ± 18,3% и 37,3 ± 22,6%, соответственно) (Фиг.4C; правая панель). Эти данные показывают, что добавление моноцитов не влияет на цитотоксическую активность Ts в 2D-анализе, несмотря на индуцированную экспрессию PD-1 на TCR T-клетках и PD-L1 на моноцитах.

Рисунок 4 .3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} (A, B) Результаты анализа импеданса, представленные как рост клеток-мишеней с течением времени в течение до 24 часов, измеренные как NCI для Tns (верхние линии) и Tdx (A) или EP (B) HBV-специфические TCR T-клетки (нижние строки).Каждая строка представляет отдельного донора. Цифры на каждом графике указывают процентное различие AUC уничтожения клеток-мишеней в совместных культурах клеток HepG2-T либо в отсутствие (синий), либо в присутствии (красный) моноцитов. Каждая кривая представляет собой среднее значение не менее двух измерений для каждого условия, и было выполнено не менее трех экспериментов. (C) Столбчатые диаграммы, представляющие среднее значение всех дифференциальных AUC, измеренных в экспериментах для Tdx (левая панель) и EP (правая панель) HBV-специфических TCR T-клеток.Статистическую значимость оценивали с помощью двустороннего теста t , при этом P <0,05 принимали в качестве доказательства статистической значимости.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} AUC - площадь под кривой; EP, мРНК-электропорированная; ВГВ, вирус гепатита В; Hep, HepG2.2.15; Мо, моноцит; NCI, нормализованный индекс ячейки; n.s., не имеет значения; TCR T-клетки, T-клетки, перенаправленные на рецептор T-клеток; Tdx, преобразованный; Tns, неспецифические Т-клетки; Ts, HBV-специфические Т-клетки.

Поскольку стандартные 2D-анализы, как сообщается, не полностью воспроизводят клеточные взаимодействия, которые имеют место в сложных системах, мы использовали трехмерную микрофлюидную модель опухоли для оценки влияния моноцитов на функциональную активность как Tdx, так и EP HBV-специфического TCR T. клетки.

Поколение 3D Microfluidic TME

Трехмерная модель опухоли in vitro была создана путем увеличения клеточного разнообразия микрофлюидной системы, ранее разработанной Pavesi et al. за счет включения первичных моноцитов человека (14). Настоящая модель опухоли, в частности, включает трехмерную совместную культуру агрегатов клеток-мишеней HepG2-preS1-GFP, HBV-специфических TCR T-клеток и моноцитов в микрофлюидном устройстве (рис.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 1A).

Моноциты суспендировали вместе с агрегатами клеток-мишеней в коллагеновом геле, вводили в центральную область гидрогеля микрофлюидного устройства и культивировали в течение ночи.На следующий день HBV-специфические TCR T-клетки (Ts или Tc) добавляли в один из жидкостных каналов и позволяли им перемещаться к средней области гидрогеля, где находятся агрегаты клеток-мишеней и моноциты. Окончательное расположение клеток в микрофлюидной платформе имитирует некоторые особенности in vivo TME и позволяет наблюдать и анализировать межклеточные взаимодействия. Окрашивание ядерным красителем DRAQ7 на мертвые клетки показало хорошую исходную жизнеспособность как моноцитов, так и агрегатов клеток-мишеней с моноцитами или без них в отсутствие HBV-специфических TCR T-клеток (Фигуры 5A, B, E).

Рисунок 5 . (A – D) Типичные агрегаты клеток-мишеней в условиях Hep (A) , Hep Mo (B) , Hep Ts (C) и Hep Ts Mo (D) , в котором присутствие мертвых клеток-мишеней составляет DRAQ7 + (красный), HBV-специфические TCR Т-клетки помечены фиолетовым красителем Cell tracker (белым), а моноциты немечены.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} (E) Коробчатая диаграмма процента объема мертвой мишени (HepG2-Pres1-GFP) после 24 часов совместного культивирования с Tdx HBV-специфическими TCR T-клетками.Также показаны данные в виде «индекса мертвой цели», где процент мертвого целевого объема нормирован на процент TCR + Т-клеток. (F) Коробчатая диаграмма процента мертвого объема-мишени после 24 ч обработки Tdx HBV-специфическими TCR T-клетками с или без PD-L1- или PD-1-блокирующих антител или их соответствующих контролей изотипа (IgG). (G) Коробчатая диаграмма процента объема мертвой мишени (HepG2-Pres1-GFP) после 24 часов совместного культивирования с EP HBV-специфическими TCR T-клетками.Также показаны данные с точки зрения «индекса мертвой цели». Точки данных отражают измеренные значения отдельных агрегатов клеток-мишеней и вместе представляют объединенные результаты трех доноров, где указаны 25-й, 50-й и 75-й процентили, а также минимальные и максимальные значения.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Столбцы нарисованы там, где было проведено сравнение с * P ≤ 0,05, ** P ≤ 0,01, *** P ≤ 0,001 и **** P ≤ 0,0001. Статистическая значимость оценивалась односторонним дисперсионным анализом с тестом множественных сравнений Холма-Сидака.EP, мРНК-электропорированная; ВГВ, вирус гепатита В; Hep, HepG2-preS1-GFP; Мо, моноцит; n.s., не имеет значения; Tc, контрольная Т-клетка; TCR T-клетки, T-клетки, перенаправленные на рецептор T-клеток; Tdx, преобразованный; Ts, HBV-специфические Т-клетки.

Ингибирующая способность моноцитов к цитотоксической активности Т-клеток Tdx TCR

Pavesi et al. продемонстрировали специфический лизис клеток HBV-HCC Т-клетками TCR (14). В соответствии с этими предыдущими результатами, мы наблюдали 46,7 ± 8,9% мертвого целевого объема для конфигурации Hep Ts (рисунки 5C, E), что в два раза больше, чем 23.3 ± 4,1% мертвого объема-мишени только для агрегатов клеток-мишеней ( Hep ) (рис. 5E). Такого увеличения мертвого объема-мишени не наблюдалось, когда агрегаты клеток-мишеней совместно культивировали с моноцитами ( Hep Mo ) или моноцитами и Tc ( Hep Tc Mo ) (21,4 ± 5% и 22,4 ± 4,5%, соответственно) ( Рисунок 5E).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Это предполагает, что именно вовлечение клетки-мишени специфически Tdx Ts, а не моноцитами или Tdx Tc, приводит к гибели клетки-мишени. Интересно, что когда присутствовали моноциты ( Hep Ts Mo ), киллерная активность Tdx Ts значительно подавлялась (Фигуры 5D, E).Взятые вместе, эти результаты демонстрируют, что трехмерная микрофлюидная модель представляет собой функциональную платформу, которую можно использовать для скрининга и сравнения в различных условиях совместного культивирования для выяснения роли моноцитов в иммунотерапии Т-лимфоцитов, в то время как стандартные двухмерные тесты цитотоксичности не помогли так что в этом случае.

Блокада оси PD-L1 / PD-1 влияет на взаимодействие моноцитов и Tdx TCR T-клеток

После наблюдения, что моноциты влияют на взаимодействие HBV-специфического Tdx Ts с агрегатами клеток-мишеней, что приводит к снижению лизиса клеток-мишеней, была проведена последующая серия экспериментов, чтобы выяснить, ингибируют ли моноциты функцию Tdx Ts через PD-L1 / PD.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} -1 ось.В культуру добавляли блокирующие антитела против PD-L1 или PD-1 и измеряли гибель агрегатов клеток-мишеней, как описано ранее (14). Блокада (рис. 5F) PD-L1 или PD-1 восстанавливала способность Tdx Ts к уничтожению (представляя объем мертвой цели 46,8 ± 11% и 48,6 ± 9,8% соответственно), тогда как добавление соответствующего изотипа Контрольные антитела не влияли на цитотоксическую активность HBV-специфических TCR T-клеток (представляя мертвый целевой объем 37,2 ± 11% и 37.0 ± 11,2%, соответственно) (рис. S4 в дополнительных материалах для репрезентативных конфокальных изображений агрегатов клеток-мишеней). Следовательно, эти результаты предполагают, что моноциты влияют на функциональность Tdx Ts посредством PD-L1 / PD-1-зависимого механизма.

Моноциты не влияют на цитотоксическую активность Т-лимфоцитов EP TCR

Чтобы проверить, является ли HBV-специфическое ингибирование TCR T-клеток явлением, специфичным для Tdx Ts, и исследовать, происходит ли такое же ингибирование в случае EP Ts, был проведен ряд экспериментов для сравнения двух типов популяций TCR T-клеток.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} .Как наблюдалось для Tdx HBV-специфичных TCR T-клеток, двукратное увеличение цитотоксической активности наблюдалось в конфигурации Hep Ts (представляющей мертвый целевой объем 38,8 ± 3,3%) по сравнению с агрегатами только целевых клеток ( Hep ). ) (что соответствует мертвому целевому объему 17,8 ± 2,9%). Совместное культивирование с моноцитами ( Hep Mo) и / или Tc ( Hep Tc или Hep Tc Mo ) не показало какого-либо увеличения объема мертвой мишени по сравнению с одними агрегатами клеток-мишеней, что еще раз указывает на то, что причина мишени гибель клеток - это вовлечение клетки-мишени в ЕР Ts, а не на моноциты или ЕР Tc.В отличие от совместного культивирования Tdx Ts, присутствие моноцитов не ингибировало EP Ts в их киллинговой активности (фиг. 5G). Таким образом, полученные данные подтверждают концепцию того, что функциональные различия действительно существуют между различными продуцируемыми TCR Т-клетками, которые, кроме того, могут наблюдаться только в трехмерной среде.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Обсуждение

Адоптивная Т-клеточная иммунотерапия недавно приобрела клинический интерес из-за текущих положительных результатов лечения жидких опухолей (58–62).Т-клетки, выделенные от пациентов, могут быть сконструированы так, чтобы экспрессировать специфический TCR для нацеливания на раковые клетки и вызывать их лизис. Однако различные механизмы подавляют взаимодействие Т-клеток с раковыми клетками, особенно в случае солидных опухолей. Среди таких препятствий наиболее важную роль играют TME и его клеточные компоненты (15, 29). В частности, моноциты привлекаются из кровотока к месту опухоли и, как известно, экспрессируют PD-L1, который при связывании с PD-1, экспрессируемым на физиологических Т-клетках, может подавлять пролиферацию Т-клеток и цитотоксическую активность в отношении раковых клеток (19, 28 , 29).Тем не менее, еще предстоит выяснить, происходит ли такая иммуносупрессия с помощью сконструированных TCR T-клеток. Ранее Pavesi et al. продемонстрировали создание трехмерной микрофлюидной модели опухоли HBV-HCC для измерения цитотоксической способности HBV-специфических TCR T-клеток (14).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} В этой статье мы увеличили сложность предыдущей модели, добавив первичные моноциты человека к модели опухоли HBV-HCC. Таким образом, мы разработали 3D in vitro TME, который имитирует миелоидный компонент внутрипеченочного TME in vivo , и впервые мы демонстрируем, что платформы 3D in vitro могут использоваться для выяснения роли моноцитов. в Т-клеточной иммунотерапии TCR.

Патологический анализ образцов, полученных от пациентов с HBV-HCC, показал, что по сравнению со здоровой тканью количество моноцитов PD-L1 + значительно выше как во внутриопухолевой, так и в периферической областях (18–20, 56). Аналогичным образом в нашей работе были более высокие доли моноцитов PD-L1 + в трехклеточных совместных культурах раковых клеток, моноцитов и HBV-специфических TCR T-клеток. В то время как предыдущие исследования предполагали ингибирующий вклад PD-L1, экспрессируемого в раковых клетках (16, 18, 63), в нашей системе доля клеток PD-L1 + HepG2-preS1-GFP существенно не изменялась при наличии HBV-специфических TCR T-клеток и / или моноцитов, и эти пропорции были намного ниже, чем наблюдаемые для моноцитов.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Таким образом, наши данные предполагают, что именно PD-L1, представленный на моноцитах, может оказывать основное влияние на цитотоксическую активность HBV-специфических TCR T-клеток.

Наши данные проточной цитометрии по экспрессии PD-1 на HBV-специфических TCR T-клетках показывают, что экспрессия PD-1 на HBV-специфических TCR T-клетках не зависит от присутствия моноцитов и, вероятно, регулируется передачей сигналов через TCR (64, 65). Интересно, что хотя как Tdx, так и EP HBV-специфические TCR T-клетки проявляли потенциал к ингибированию моноцитами, их способность убивать раковые клетки-мишени, по-видимому, не изменилась независимо от присутствия моноцитов в 2D-анализе цитотоксичности.

Вдохновленные нашими нулевыми наблюдениями в 2D-системе, мы перешли к 3D-микрофлюидной модели опухоли, которая, помимо ряда других преимуществ, является физиологическим улучшением системы 2D in vitro (43, 45). Сначала мы установили, что в наших руках мы создали надежную систему, наблюдая, что и Tdx, и EP HBV-специфические TCR T-клетки способны эффективно убивать целевые клетки HepG2-preS1-GFP, что согласуется с предыдущим отчетом (14).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Мы подтвердили, что цитотоксическая активность TCR T-клеток специфически связана с их распознаванием пептида HBs183-191, и, что более важно, мы обнаружили, что при добавлении моноцитов в систему Tdx HBV-специфические TCR T-клетки проявляли пониженную цитотоксическую активность. в сторону клеток HepG2-preS1-GFP.

Более того, в соответствии с наблюдаемыми профилями экспрессии PD-L1 / PD-1, это Tdx HBV-специфическое ингибирование Т-лимфоцитов TCR отменялось, когда передача сигнала PD-L1 / PD-1 блокировалась блокирующим антителом против PD-L1 или ПД-1. Примечательно, что Tdx HBV-специфическая цитотоксическая активность TCR T-клеток восстанавливалась в той же степени с блокировкой PD-L1 или PD-1, что подтверждает гипотезу о том, что PD-L1 является ключевым лигандом, участвующим в наблюдаемом Tdx HBV-специфическом ингибировании TCR T-клеток. .

Преобладающая роль моноцитов PD-L1 усиливается, когда мы сравнивали между (i) совместным культивированием трех клеток с блокирующим антителом против PD-L1 или PD-1, и состоянием (ii) только Tdx HBV.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} -специфические Т-клетки TCR и клетки-мишени.Если бы PD-L1 на клетках-мишенях способствовал ингибированию Tdx HBV-специфических TCR T-клеток, тогда Tdx HBV-специфическая цитотоксическая активность TCR T-клеток, наблюдаемая в первом (i), была бы выше, чем во втором (ii). Однако это было не так здесь, где разница между (i) и (ii) не была статистически значимой. Таким образом, данные убедительно свидетельствуют о том, что PD-L1, экспрессируемый на клетках HepG2-preS1-GFP, не вносил фундаментального вклада в Tdx HBV-специфическое ингибирование TCR T-клеток.

Интересно, что в отличие от Tdx HBV-специфических TCR T-клеток, моноциты не подавляли цитотоксическую активность EP HBV-специфических TCR T-клеток в нашей модели микрофлюидной опухоли.Эти результаты представляют клинический интерес, учитывая легкость генерации EP TCR T-клеток и присущую им самоограничивающуюся цитотоксичность из-за их временной экспрессии TCR (12). Более того, дифференциальное влияние моноцитов на два типа TCR-T-клеток, вероятно, связано с различием в их статусе активации в результате использования различных инженерных методологий и процессов размножения и культивирования T-клеток (11, 12).3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} В частности, Tdx HBV-специфические TCR T-клетки были размножены в течение по крайней мере 2 недель с помощью коктейля цитокинов γ-цепи (γc), включающего IL-2, IL-7 и IL-15, которые могли вызывать размножение клеток, которые более чувствительны к ингибированию PD-1.Напротив, EP HBV-специфические TCR T-клетки культивировали только с IL-2 и в течение только недели. Подобное явление наблюдали Kinter et al. где Т-клетки, которые были обработаны коктейлем цитокинов, аналогичным нашим Т-клеткам Tdx, активировали PD-1, который после лигирования проявлял ингибирование эффекторных функций Т-клеток по сравнению с необработанными Т-клетками (66). Дальнейшие исследования, изучающие дифференциальную экспрессию маркеров истощения, могут помочь прояснить наблюдаемое нами разнообразное поведение по-разному продуцируемых Т-лимфоцитов.

Наши результаты подтверждают явное преимущество наличия более реалистичной 3D-модели опухоли перед классическими 2D-платформами для скрининга различных терапевтических подходов, как показано здесь, для различных продуцируемых TCR T-клеток.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Фактически, аналогичные ограничения 2D-анализов также обсуждались в исследовании Pavesi et al. где двухмерный анализ цитотоксичности показал завышенную оценку гибели Т-клеток и невозможность измерить влияние различных уровней кислорода на поведение Т-клеток (14). Последовательные наблюдения относительно чувствительности 2D-культур по сравнению с 3D-культурами также были сделаны в контексте химиотерапевтических агентов, где эффекты лекарств, наблюдаемые в 3D, были резко уменьшены по сравнению с эффектами, показанными теми же препаратами в 2D-настройке (67–70).

Действительно, по сравнению с 2D-настройкой, трехмерная микрофлюидная in vitro иммуногенная TME, которую мы разработали, более точно имитирует физиологическую настройку in vivo , поскольку клетки HBV-HCC представлены в виде агрегатов в 3D-матрице и потенциально позволяют один для исследования влияния различных свойств TME или клеточных игроков на лечение рака. При такой пространственной организации клетки внешнего обода первыми подвергаются нацеливанию и лизированию HBV-специфическими TCR T-клетками, тогда как клетки ядра менее восприимчивы к контактно-зависимому лизису.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Напротив, стандартная 2D-установка состоит из клеток HBV-HCC, выращенных в виде монослоя, который полностью перекрывается HBV-специфическими TCR T-клетками, что позволяет быстрее и успешнее убивать, поскольку TCR T-клетки оседают непосредственно на HBV-HCC. ячеек под действием силы тяжести без сопротивления, с которым они в противном случае столкнулись бы при миграции в трехмерном пространстве или при входе в совокупность трехмерных клеток. Кроме того, по сравнению с обычными трехмерными культурами опухолей наша трехмерная микрофлюидная система позволяет повысить архитектурную сложность TME за счет добавления большего количества клеточных игроков (в данном случае моноцитов) и позволяет исследовать влияние каждого игрока на терапию рака.

Будущие эксперименты могут быть выполнены для выяснения механизмов, участвующих во взаимодействиях моноцитов с обоими типами TCR T-клеток. Это позволило бы нам использовать наши наблюдения для оптимизации описанных в настоящее время терапевтических стратегий, а также распространить эти исследования на другие виды рака.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Однако наши результаты уже имеют важное значение для клинической терапии, что продемонстрировано способностью нашей трехмерной микрожидкостной доклинической модели прогнозировать различия во взаимодействии in vivo различных типов Т-клеток TCR с моноцитами, обеспечивая, таким образом, терапевтическую ценность за счет выявления наиболее эффективных форма иммунной терапии TCR T-клетками для индивидуального лечения.

Заявление об этике

Это исследование было проведено в соответствии с рекомендациями Институционального наблюдательного совета Национального университета Сингапура с письменного информированного согласия всех субъектов. Все субъекты дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Протокол был одобрен Наблюдательным советом Национального университета Сингапура.

Авторские взносы

Концептуализация: SL, GA, AP, AT, AB, RK и SCW; методология: SL, GA и EC; расследование: SL, GA, EC; формальный анализ: SL и EC; письменная форма - первоначальный вариант: SL, GA и EC; написание - просмотр и редактирование: SL, GA, EC, AP, AT, AB, RK и SCW; привлечение финансирования: AB, RK и SCW; ресурсы: AB, RK и SCW; надзор: GA, AB, RK и SCW.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Финансирование

Исследование было поддержано Национальным исследовательским фондом (NRF), канцелярией премьер-министра Сингапура, в рамках программы CREATE, Альянсом Сингапур-Массачусетского технологического института (SMART) по биосистемам и микромеханике (BioSyM), IRG, Советом по биомедицинским исследованиям (BMRC). ), A * STAR и сингапурской премии исследователей трансляционных исследований (STaR) (NMRC / STaR / 013/2012) для AB.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу http://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2018.00416/full#supplementary-material.

Сокращения

TCR T-клетка, Т-клетка, перенаправленная на Т-клеточный рецептор; ЭП, электропорированный; Tdx, преобразованный; TME, микросреда опухоли.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Список литературы

2. Манзо Т., Штурмхейт Т., Бассо В., Петрозьелло Э., Мишелини Р.Х., Риба М. и др. Т-клетки, перенаправленные на второстепенный антиген гистосовместимости, инструктируют внутриопухолевую экспрессию TNFα и расширяют возможности адоптивной клеточной терапии для солидных опухолей. Cancer Res (2017) 77: 658–71. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-16-0725

CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Миядзаки Ю., Фудзивара Х., Асаи Х., Очи Ф., Очи Т., Адзума Т. Разработка новой адоптивной иммунотерапии на основе перенаправленных Т-клеток, нацеленной на обратную транскриптазу теломеразы человека для Т-клеточного лейкоза взрослых. Кровь (2013) 121: 4894–902. DOI: 10.1182 / кровь-2012-11-465971

CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. Касим В., Брунетто М., Геринг А. Дж., Сюэ С.А., Шурих А., Хакпур А. и др.Иммунотерапия метастазов ГЦК аутологичными Т-клеточными рецепторами, перенаправленными Т-клетками, нацеленными на HBsAg у пациента после трансплантации печени.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} J Hepatol (2015) 62: 486–91. DOI: 10.1016 / j.jhep.2014.10.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Руни CM, Ng CYC, Loftin S, Smith CA, Li C., Krance RA, et al. Использование генетически модифицированных вирус-специфических Т-лимфоцитов для контроля лимфопролиферации, связанной с вирусом Эпштейна-Барра. Ланцет (1995) 345: 9–13. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (95) 91150-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Роббинс П.Ф., Морган Р.А., Фельдман С.А., Ян Дж.С., Шерри Р.М., Дадли М.Э. и др. Регрессия опухоли у пациентов с метастатической саркомой синовиальных клеток и меланомой с использованием генно-инженерных лимфоцитов, реактивных с NY-ESO-1. J Clin Oncol (2011) 29: 917–24. DOI: 10.1200 / JCO.2010.32.2537

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

8. Лай Ю.Г., Гельфанов В., Гельфанова В., Кулик Л., Чу К.Л., Дженг С.В. и др.IL-15 способствует выживанию, но не дифференцировке эффекторной функции CD8 (+) TCR альфа-бета (+) интраэпителиальных лимфоцитов кишечника.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} J Immunol (1999) 163: 5843-50.

Google Scholar

9. Scheffel MJ, Scurti G, Simms P, Garrett-Mayer E, Mehrotra S, Nishimura MI, et al. Эффективность адоптивной Т-клеточной терапии повышается за счет лечения антиоксидантом N-ацетилцистеином, который ограничивает вызванную активацией гибель Т-клеток. Cancer Res (2016) 76: 6006–16. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-16-0587

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Таманг Д.Л., Алвес Б.Н., Эллиотт В., Фрейзер С.А., Редельман Д., Худиг Д. Низкая доза ИЛ-15 вызывает мгновенное возбуждение лимфоцитов с низким уровнем Т CD44 в отсутствие антигена. Cell Immunol (2008) 251: 93–101. DOI: 10.1016 / j.cellimm.2008.04.007

CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Геринг А.Дж., Сюэ С., Хо З.З., Теох Д., Рюдл С., Чиа А. и др. Разработка вирус-специфических Т-клеток, которые нацелены на инфицированные HBV гепатоциты и клеточные линии гепатоцеллюлярной карциномы.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} J Hepatol (2011) 55: 103–10. DOI: 10.1016 / j.jhep.2010.10.025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Ко С., Шимасаки Н., Суванаруск Р., Хо З. З., Чиа А., Бану Н. и др. Практический подход к иммунотерапии гепатоцеллюлярной карциномы с использованием Т-клеток, перенаправленных против гепатита. Мол тер нуклеиновых кислот (2013) 2: e114. DOI: 10.1038 / mtna.2013.43

CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Павеси А., Тан А.Т., Чен МБ, Адриани Г., Бертолетти А., Камм Р.Д.Использование микрофлюидики для исследования экстравазации опухолевых клеток и иммунотерапии Т-клетками. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc (2015) 2015: 1853–6. DOI: 10.1109 / EMBC.2015.7318742

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Pavesi A, Tan AT, Koh S, Chia A, Colombo M, Antonecchia E, et al. Трехмерная микрофлюидная модель для доклинической оценки созданных TCR Т-клеток против солидных опухолей.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} JCI Insight (2017) 2: e89762. DOI: 10.1172 / jci.insight.89762

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Джойс Дж. А., Фирон Д. Т.. Исключение Т-клеток, иммунная привилегия и микросреда опухоли. Наука (2015) 348: 74–80. DOI: 10.1126 / science.aaa6204

CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Чен Д.С., Ирвинг Б.А., Ходи Ф.С. Молекулярные пути: иммунотерапия следующего поколения, ингибирующая запрограммированную смерть-лиганд-1 и запрограммированную смерть-1. Clin Cancer Res (2012) 18: 6580–7.DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-12-1362

CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Гао Q, Ван XY, Qiu SJ, Yamato I., Sho M, Nakajima Y, et al. Сверхэкспрессия PD-L1 в значительной степени ассоциируется с агрессивностью опухоли и послеоперационным рецидивом гепатоцеллюлярной карциномы человека. Clin Cancer Res (2009) 15: 971–9. DOI: 10.1158 / 1078-0432.CCR-08-1608

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Kuang DM, Zhao Q, Peng C, Xu J, Zhang JP, Wu C, et al.Активированные моноциты в перитуморальной строме гепатоцеллюлярной карциномы способствуют иммунной привилегии и прогрессированию заболевания через PD-L1. J Exp Med (2009) 206: 1327–37. DOI: 10.1084 / jem.20082173

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Peng G, Li S, Wu W, Tan X, Chen Y, Chen Z. Повышенная регуляция PD-1 связана с HBV-специфической дисфункцией Т-клеток у пациентов с хроническим гепатитом B. Mol Immunol (2008) 45: 963–70. DOI: 10.1016 / j.molimm.2007.07.038

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Чжан Ю., Кан С., Шен Дж., Хе Дж., Цзян Л., Ван В. и др. Прогностическое значение экспрессии запрограммированной клеточной смерти 1 (PD-1) или лиганда PD-1 1 (PD-L1) при раке эпителиального происхождения: метаанализ. Медицина (2015) 94: e515. DOI: 10.1097 / md.0000000000000515

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Хайле С.Т., Бош Дж.Дж., Агу Н.И., Зиндер М., Сомасундарам П., Шривастава М.К. и др.Подавление Т-клеток, запрограммированная лигандом 1 гибели опухолевых клеток, преодолевается совместной экспрессией CD80. J Immunol (2017) 186: 6822–9. DOI: 10.4049 / jimmunol.1003682

CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Markwick LJL, Riva A, Ryan JM, Cooksley H, Palma E, Tranah TH, et al. Блокада PD1 и TIM3 восстанавливает врожденный и адаптивный иммунитет у пациентов с острым алкогольным гепатитом. Гастроэнтерология (2015) 148: 590–602. DOI: 10.1053 / j.gastro.2014.11.041

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Хамид О., Роберт С., Дауд А., Ходи Ф. С., Хву В. Дж., Кеффорд Р. и др. Безопасность и опухолевые реакции с ламбролизумабом (анти-PD-1) при меланоме. N Engl J Med (2013) 369: 134–44. DOI: 10.1056 / NEJMoa1305133

CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Раджан А., Галли Дж. Л.. Ниволумаб (анти-PD-1, BMS-936558, ONO-4538) у пациентов с распространенным немелкоклеточным раком легкого.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Transl Lung Cancer Res (2014) 3: 403–5.DOI: 10.3978 / j.issn.2218-6751.2014.09.02

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

26. Вестин Дж. Р., Чу Ф, Чжан М., Фаяд Л. Е., Квак Л. В., Фаулер Н. и др. Безопасность и активность блокады PD-1 пидилизумабом в комбинации с ритуксимабом у пациентов с рецидивом фолликулярной лимфомы: открытое исследование фазы 2 в одной группе. Lancet Oncol (2014) 15: 69–77. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70551-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27.Wolchok JD, Kluger H, Callahan MK, Postow MA, Rizvi NA, Lesokhin AM, et al. Ниволумаб плюс ипилимумаб при запущенной меланоме. N Engl J Med (2013) 369: 122–33. DOI: 10.1056 / NEJMoa1302369

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Kuang DM, Wu Y, Chen N, Cheng J, Zhuang SM, Zheng L. Гиалуронан, полученный из опухоли, индуцирует образование иммуносупрессивных макрофагов посредством временной ранней активации моноцитов.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Кровь (2007) 110: 587–95.DOI: 10.1182 / кровь-2007-01-068031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Аллавена П., Сика А., Солинас Г., Порта С., Мантовани А. Воспалительная микросреда в прогрессировании опухоли: роль связанных с опухолью макрофагов. Crit Rev Oncol Hematol (2008) 66: 1–9. DOI: 10.1016 / j.critrevonc.2007.07.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

36. Антониос Дж. П., Сото Х., Эверсон Р. Г., Маугон Д., Орпилла Дж. Р., Шин Н. П. и др.Иммуносупрессивные миелоидные клетки, инфильтрирующие опухоль, опосредуют адаптивную иммунную резистентность через механизм PD-1 / PD-L1 в глиобластоме. Neuro Oncol (2017) 19: 796–807. DOI: 10,1093 / neuonc / now287

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. Хуанг Р., Франсуа А., Макгрей А.Д., Милиотто А., Хуанг Р., Франсуа А. и др. Компенсаторная регуляция PD-1, LAG-3 и CTLA-4 ограничивает эффективность блокады контрольных точек одним агентом при метастатическом раке яичников.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Онкоиммунология (2017) 6: e1249561.DOI: 10.1080 / 2162402X.2016.1249561

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Тан-Гарсия А., Вай ЛЭ, Чжэн Д., Чеккарелло Э., Джо Дж., Бану Н. и др. Внутрипеченочные макрофаги CD206 + способствуют воспалению при запущенном вирусном заболевании печени. . J Hepatol (2017) 67: 490–500. DOI: 10.1016 / j.jhep.2017.04.023

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Teng Y, Shen Z, Kao C, Tsai T. Мышиные модели гепатоцеллюлярной карциномы: гепатоканцерогенез, связанный с вирусом гепатита B, и гаплонедостаточные гены-супрессоры опухоли. World J Gastroenterol (2016) 22: 300–25. DOI: 10.3748 / wjg.v22.i1.300

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

40. Уилсон Е.М., Биал Дж., Тарлоу Б., Биал Дж., Дженсен Б., Грейнер Д.Л. и др. Обширная двойная гуманизация печени и гемопоэза у мышей FRGN. Stem Cell Res (2014) 13: 404–12.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} DOI: 10.1016 / j.scr.2014.08.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41. Роденхайзер Д., Дин Т., Д’Арканджело Э., Макгиган А.П.Текущий ландшафт трехмерных моделей опухолей in vitro: какие признаки рака доступны для открытия лекарств? Adv Healthc Mater (2018) 1701174. DOI: 10.1002 / adhm.201701174

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Адриани Г., Ма Д., Павеси А., Гох ELK, Камм РД. Моделирование гематоэнцефалического барьера в трехмерной микрофлюидной системе с тройным культивированием. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc (2015) 2015: 338–41. DOI: 10.1109 / EMBC.2015.7318368

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43.Адриани Г., Павеси А., Тан А.Т., Бертолетти А., Тиери Дж. П., Камм Р. Д.. Микрожидкостные модели для адоптивной клеточной иммунотерапии рака. Drug Discov Today (2016) 21: 1472–8. DOI: 10.1016 / j.drudis.2016.05.006

CrossRef Полный текст | Google Scholar

44.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Адриани Г, Ма Д., Павеси А, Камм РД. Трехмерная нейрососудистая микрофлюидная модель, состоящая из нейронов, астроцитов и церебральных эндотелиальных клеток в качестве гематоэнцефалического барьера. Лабораторный чип (2017) 17: 448–59. DOI: 10.1039 / C6LC00638H

CrossRef Полный текст | Google Scholar

45.Boussommier-Calleja A, Li R, Chen MB, Wong SC, Kamm RD. Микрофлюидика: новый инструмент для моделирования противораковых взаимодействий. Тенденции рака (2016) 2: 6–19. DOI: 10.1016 / j.trecan.2015.12.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

46. Хо Ю.Т., Адриани Г., Бейер С., Нхан П.Т., Камм Р.Д., Ках Дж.С.Й. Простой метод исследования проницаемости сосудов наночастиц в наномедицине. Sci Rep (2017) 7: 707. DOI: 10.1038 / s41598-017-00750-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

47.Павеси А., Адриани Дж., Тай А., Варкиани М.Э., Йеап WH, Вонг С.К. и др. Разработка платформы для трехмерной микрожидкостной культуры для полевого применения при лечении опухолей.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Sci Rep (2016) 6: 26584. DOI: 10.1038 / srep26584

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Penny HL, Sieow JL, Adriani G, Yeap WH, See Chi Ee P, San Luis B, et al. Метаболизм Варбурга в макрофагах, обусловленных опухолью, способствует метастазированию протоковой аденокарциномы поджелудочной железы человека. Онкоиммунология (2016) 5: e1191731.DOI: 10.1080 / 2162402X.2016.1191731

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Тай А., Павеси А., Язди С.Р., Лим СТ, Варкиани М.Э. Успехи микрофлюидики в борьбе с инфекционными заболеваниями. Biotechnol Adv (2016) 34: 404–21. DOI: 10.1016 / j.biotechadv.2016.02.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Ту Т, Ван З., Бай Дж, Сун В., Пэн В.К., Хуанг Р.Й. и др. Быстрое прототипирование вогнутых микролунок для формирования трехмерных агрегатов многоклеточного рака для скрининга лекарств. Adv Healthc Mater (2014) 3: 609–16.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} DOI: 10.1002 / adhm.201300151

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

51. Адриани Дж., Бай Дж., Вонг С., Камм Р. Д., Тиери Дж. П. Макрофаги M2a вызывают контакт-зависимую дисперсию агрегатов клеток карциномы. Макрофаг (2016) 3: e1222. DOI: 10.14800 / макрофаг.1222

CrossRef Полный текст | Google Scholar

52. Бай Дж., Адриани Дж., Данг Т.М., Ту Т.Й., Пенни ХХЛ, Вонг С.К. и др. Контактно-зависимая дисперсия агрегатов карциномы макрофагами M2a посредством взаимодействий ICAM-1 и интегрина β2. Oncotarget (2015) 6: 25295–307. DOI: 10.18632 / oncotarget.4716

CrossRef Полный текст | Google Scholar

53. Ареф А.Р., Хуанг Р.Й.Дж., Ю В., Чуа К.Н., Сунь В., Ту Т.Й. и др. Скрининг терапевтических блокаторов ЭМП в трехмерном микросреде. Интегр Биол (2013) 5: 381–9. DOI: 10.1039 / c2ib20209c

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

54. Шин И, Хан С., Чон Дж. С.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} , Ямамото К., Зервантонакис И. К., Судо Р. и др.Микрофлюидный анализ для одновременного культивирования нескольких типов клеток на поверхностях или внутри гидрогелей. Nat Protoc (2012) 7: 1247–59. DOI: 10.1038 / nprot.2012.051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

55. Moreno-Cubero E, Larrubia JR. Специфическая иммунотерапия CD8 (+) T-клеточного ответа при гепатоцеллюлярной карциноме и вирусном гепатите. World J Gastroenterol (2016) 22: 6469–83. DOI: 10.3748 / wjg.v22.i28.6469

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

56.Ши Ф, Ши М., Цзэн З., Ци Р.З., Лю З.В., Чжан Дж.Й. и др. Активация PD-1 и PD-L1 способствует апоптозу CD8 + Т-клеток и послеоперационному рецидиву у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой. Int J Cancer (2011) 128: 887–96. DOI: 10.1002 / ijc.25397

CrossRef Полный текст | Google Scholar

57. Чжоу Г., Спренгерс Д., Бур ППЦ, Дукас М., Шутц Х., Манчам С.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} и др. Антитела против молекул иммунных контрольных точек восстанавливают функции Т-лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, при гепатоцеллюлярных карциномах. Гастроэнтерология (2017) 153 (4): 1107.e – 19.e. DOI: 10.1053 / j.gastro.2017.06.017

CrossRef Полный текст | Google Scholar

58. Брентдженс Р., Давила М.Л., Ривьер I, Парк Дж., Коуэлл Л.Г., Бартидо С. и др. Т-клетки, нацеленные на CD19, быстро вызывают молекулярную ремиссию у взрослых с резистентным к химиотерапии острым лимфобластным лейкозом. Sci Transl Med (2013) 5: 177ra38. DOI: 10.1126 / scitranslmed.3005930

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

59.Grupp SA, Калос М., Барретт Д., Апленк Р., Портер Д.Л., Рейнгольд С.Р. и др. Т-клетки, модифицированные химерными антигенными рецепторами, для лечения острого лимфолейкоза. N Engl J Med (2013) 368: 1509–18. DOI: 10.1056 / NEJMoa1215134

CrossRef Полный текст | Google Scholar

60. Кочендерфер Дж.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Н., Дадли М. Е., Кассим С. Х., Сомервилль РПТ, Карпентер Р. О., Марьялис С. С. и др. Рефрактерная к химиотерапии диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома и вялотекущие В-клеточные злокачественные новообразования можно эффективно лечить аутологичными Т-клетками, экспрессирующими рецептор химерного антигена к CD19. J Clin Oncol (2015) 33: 540–9. DOI: 10.1200 / JCO.2014.56.2025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

61. Ли Д.В., Кочендерфер Дж., Стетлер-Стивенсон М., Цуй Ю.К., Делбрук С., Фельдман С.А. и др. Т-клетки, экспрессирующие рецепторы химерного антигена CD19, при остром лимфобластном лейкозе у детей и молодых людей: испытание фазы 1 с увеличением дозы. Ланцет (2015) 385: 517–28. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (14) 61403-3

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

62.Maude SL, Frey NV, Shaw PA, Aplenc R, Barrett DM, Bunin NJ, et al. Химерные антигенные рецепторные Т-клетки для устойчивой ремиссии при лейкемии.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} N Engl J Med (2014) 371: 1507–17. DOI: 10.1056 / NEJMoa1407222

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

63. Dong H, Strome SE, Salomao DR, Tamura H, Hirano F, Flies DB и др. Связанный с опухолью B7-h2 способствует апоптозу Т-клеток: потенциальному механизму уклонения от иммунитета. Nat Med (2002) 8: 793–800. DOI: 10.1038 / нм 730

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

65. Соус D, Алмейда Дж. Р., Ларсен М., Аро Л., Отран Б., Фриман Дж. Дж. И др. Экспрессия PD-1 на человеческих CD8 Т-клетках зависит как от состояния дифференцировки, так и от состояния активации. AIDS (2007) 21: 2005–13. DOI: 10.1097 / QAD.0b013e3282eee548

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

66. Кинтер А.Л., Годбаут Э.Д., Макнелли Дж. П., Серети И., Роби Г.А., Ши МАО и др. Обычные цитокины гамма-цепи ИЛ-2, ИЛ-7, ИЛ-15 и ИЛ-21 индуцируют экспрессию запрограммированной смерти-1 и ее лигандов.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} J Immunol (2008) 181: 6738–46. DOI: 10.4049 / jimmunol.181.10.6738

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

67. Dit Faute MA, Laurent L, Ploton D, Poupon M. Отличительные изменения инвазивности, лекарственной устойчивости и клеточно-клеточной организации в 3D-культурах MCF-7, линии клеток рака молочной железы человека и ее варианта с множественной лекарственной устойчивостью. Clin Exp Metastasis (2002) 19 (2): 161–8. DOI: 10.1023 / A: 1014594825502

CrossRef Полный текст | Google Scholar

69.Герлах А., Гертер П., Хентшель Х, Фрош П. Дж., Аккер Х. Влияние nIFN-бета и rIFN-гамма на рост и морфологию двух клеточных линий меланомы человека: сравнение двух- и трехмерной культуры. Int J Cancer (1994) 56: 249–54. DOI: 10.1002 / ijc.20218

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

70. Kunz-Schughart LA, Freyer JP, Hofstaedter F, Ebner R. Использование трехмерных культур для высокопроизводительного скрининга: модель многоклеточного сфероида.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} J Biomol Screen (2004) 9: 273–85. DOI: 10.1177 / 1087057104265040

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3D машинное зрение | Visionary-T

3D машинное зрение | Visionary-T | БОЛЬНОЙ

Обзор семейства продуктов английский Чешский Датский Немецкий испанский Финский Французский Итальянский Японский Корейский нидерландский язык Польский португальский русский Шведский турецкий Традиционный китайский Китайский

3D-снимок - для универсального использования в помещении

Ваши преимущества

  • Более 25000 значений расстояния и интенсивности за один снимок
  • Трехмерная информация также доступна для стационарных приложений
  • Простая установка и быстрая замена датчика
  • Программный интерфейс для использования трехмерных данных для дополнительной оценки на внешнем хосте
  • Visionary-T CX предоставляет трехмерные данные через Ethernet
  • Visionary-T AG предлагает интеллектуальное сокращение данных
  • Visionary-T DT - настраиваемый датчик обнаружения трехмерного изображения «plug and play»
  • AP Visionary-T основан на SICK AppSpace и позволяет создавать приложения с помощью SICK AppStudio, а также загружать ключевые приложения для конкретных приложений в датчик с помощью SICK AppManager

Обзор

3D-снимок - для универсального использования в помещении

Датчики технического зрения

Visionary-T 3D от SICK предлагают максимальную гибкость для использования внутри помещений благодаря своей инновационной технологии 3D-снимков.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Visionary-T предоставляет информацию о глубине в реальном времени для каждого пикселя - даже для стационарных приложений - на основе измерения времени пролета. Датчики передают полные необработанные данные и данные, которые были специально предварительно обработаны для рассматриваемого приложения. Кроме того, однако, также можно передавать измеренные значения, которые уже были оценены, что приводит к простым откликам датчика. Таким образом, всегда передается нужная информация - адаптированная для соответствующего приложения.Высокопроизводительные инструменты визуализации и надежная трехмерная информация делают Visionary-T идеальным решением для приложений, включая внутреннюю логистику, робототехнику или промышленные транспортные средства.

Краткий обзор

  • Запись до 50 3D-изображений в секунду
  • Значения расстояния: 144 x 176 пикселей на запись
  • Вывод 3D-данных через интерфейс Gigabit Ethernet и простые цифровые выходы
  • Предоставление данных для конкретного приложения
  • Диапазон температур: 0 ° C.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} .. 50 ° C или 0 ° C ... 45 ° C (в зависимости от корпуса), степень защиты: IP67

и nbsp

Работая вместе как равняется

Благодаря датчикам SICK роботы воспринимают более точно.Для всех задач в области робототехники: зрение роботов, безопасная робототехника, оборудование на конце руки и обратная связь по положению.
Узнать больше

Промышленность 4.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} 0 набирает скорость: Автоматическая гибкость для мобильных транспортных средств и тележек

Наш портфель модульных решений для мобильных платформ теперь позволяет с легкостью реализовать линейное управление, навигацию, позиционирование, распознавание окружающей среды, безопасность и обработку грузов.

Узнать больше

Приложения

  • Обзор технических данных

    Обзор технических данных

    Технология Трехмерный снимок, анализ изображения
    Измерения в оттенках серого
    910 910 910 910 Источник света 910 Светодиод, невидимый, инфракрасный, 850 нм
    Заводская калибровка
    Степень защиты IP67
    Программное обеспечение конфигурации SOPAS ET / Telegram интерфейс / Web-интерфейс Интерфейс / SICK AppManager / SICK AppStudio / Веб-интерфейс
    Ethernet ✔, Полный поток данных, объединяющий значения расстояния, интенсивности и достоверности в одном снимке плюс управление устройством / ✔, с возможностью полярного или декартового сокращение данных / ✔, управление устройством, положение и статус обнаружения e каждый кубоид и группа / ✔, Данные зависят от приложения или могут быть определены в независимо разработанных приложениях.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}
Все технические данные можно найти в сопровождении отдельного продукта.

Загрузки

ВЕРХ

Подождите ...

Ваш запрос обрабатывается и может занять несколько секунд.

Лучшая 3d футболка по цене - Отличные предложения на 3d футболку от мировых продавцов 3d футболок

Отличные новости !!! Вы попали в нужное место для 3D-футболки.К настоящему времени вы уже знаете, что что бы вы ни искали, вы обязательно найдете это на AliExpress. У нас буквально тысячи отличных продуктов во всех товарных категориях. Ищете ли вы товары высокого класса или дешевые и недорогие оптовые закупки, мы гарантируем, что он есть на AliExpress.

Вы найдете официальные магазины торговых марок наряду с небольшими независимыми продавцами со скидками, каждый из которых предлагает быструю доставку и надежные, а также удобные и безопасные способы оплаты, независимо от того, сколько вы решите потратить.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

AliExpress никогда не уступит по выбору, качеству и цене. Каждый день вы будете находить новые онлайн-предложения, скидки в магазинах и возможность сэкономить еще больше, собирая купоны. Но вам, возможно, придется действовать быстро, так как эта лучшая трехмерная футболка в кратчайшие сроки станет одним из самых востребованных бестселлеров. Подумайте, как вам будут завидовать друзья, когда вы скажете им, что купили свою 3D-футболку на AliExpress.Благодаря самым низким ценам в Интернете, дешевым тарифам на доставку и возможности получения на месте вы можете еще больше сэкономить.

Если вы все еще не уверены в трехмерной футболке и думаете о выборе аналогичного товара, AliExpress - отличное место для сравнения цен и продавцов.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Мы поможем вам решить, стоит ли доплачивать за высококлассную версию или вы получаете столь же выгодную сделку, приобретая более дешевую вещь.А если вы просто хотите побаловать себя и потратиться на самую дорогую версию, AliExpress всегда позаботится о том, чтобы вы могли получить лучшую цену за свои деньги, даже сообщая вам, когда вам будет лучше дождаться начала рекламной акции. и ожидаемая экономия.AliExpress гордится тем, что у вас всегда есть осознанный выбор при покупке в одном из сотен магазинов и продавцов на нашей платформе. Реальные покупатели оценивают качество обслуживания, цену и качество каждого магазина и продавца.Кроме того, вы можете узнать рейтинги магазина или отдельных продавцов, а также сравнить цены, доставку и скидки на один и тот же продукт, прочитав комментарии и отзывы, оставленные пользователями. Каждая покупка имеет звездный рейтинг и часто имеет комментарии, оставленные предыдущими клиентами, описывающими их опыт транзакций, поэтому вы можете покупать с уверенностью каждый раз.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Короче говоря, вам не нужно верить нам на слово - просто слушайте миллионы наших довольных клиентов.

А если вы новичок на AliExpress, мы откроем вам секрет.Непосредственно перед тем, как вы нажмете «купить сейчас» в процессе транзакции, найдите время, чтобы проверить купоны - и вы сэкономите еще больше. Вы можете найти купоны магазина, купоны AliExpress или собирать купоны каждый день, играя в игры в приложении AliExpress. Вместе с бесплатной доставкой, которую предлагают большинство продавцов на нашем сайте, вы сможете приобрести 3d t shirt по самой выгодной цене в Интернете.

У нас всегда есть новейшие технологии, новейшие тенденции и самые обсуждаемые лейблы.На AliExpress отличное качество, цена и сервис всегда в стандартной комплектации.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Начните самый лучший шоппинг прямо здесь.

Нить для 3D-принтера Taulman T-Glase

Taulman t-glase PETT-нить хорошо печатается на 3D-принтере, но при этом обладает высокой степенью прозрачности. Модели, напечатанные на т-стекле, имеют отличную поверхность, могут хорошо отражать свет и, в зависимости от геометрии детали, могут даже мерцать и блестеть.Одной из наиболее интересных характеристик этой нити накала для 3D-принтера Taulman является ее способность действовать как световод, пропускающий свет. Для большей прозрачности используйте слой большей высоты.

Прочитайте больше

t-glase - это филамент на основе PETT, который можно использовать в большинстве настольных 3D-принтеров. Эта нить на 100% пригодна для вторичной переработки, практически не усаживается и доступна в различных цветах.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }} Эту нить можно экструдировать в широком диапазоне температур.

t-glase не выделяет запаха или дыма во время экструзии и на 100% пригоден для вторичной переработки. Это также одобренная FDA нить, которая позволяет вам проявлять столько творчества, сколько вы хотите.

Характеристики нити

Диаметр нити: 3 мм (0,12 дюйма)

Количество нити: 1 фунт (0,45 кг)

Цвет нити может отличаться

Характеристики печати

Требования к головке специального инструмента: рекомендуется LulzBot Hexagon Hot End

Диапазон температур горячего конца: 230 ° C

Поверхность печати: рекомендуется пленка PEI

Температура поверхности печати: 60 ° C

Информация об упаковке

Диаметр рулона и стиль упаковки могут различаться в зависимости от выбранного цвета.Вес нити остается прежним.

Нить T-Glase поставляется в вакуумной упаковке и смонтирована на катушке

2,85 мм Катушка 1 фунт прозрачный Т-стекло

.3Д т: {{ 'add_block.title' | t }}

Ответить

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *